芦荟多糖的分离纯化及结构分析.pdf

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1、Vol.24高等学校化学学报No.72003年7月CHEMICALJOURNALOFCHINESEUNIVERSITIES1189*1192芦荟多糖的分离纯化及结构分析闫吉昌~崔春月~张奕~初人合(东北师范大学化学学院~长春130024)摘要以库拉索芦荟(Aloebarbadensismiller)为材料~经热水抽提~乙醇分级沉淀得2种酸性多糖PSA1和PSA2~用酶法和Seveg法去除蛋白质.经纸层析和Sephadex凝胶柱层析~证实均为单一组分.经薄层层析和乙酰化GC/MS分析表明~多糖PSA1由甘露糖和葡萄糖组成~

2、摩尔比为1=1.3.多糖PSA2主要由甘露糖组成~经红外光谱及核磁共振证明了PSA2为部分乙酰化的甘露聚糖.经过改良的Hakomori甲基化~高碘酸氧化和Smith降解分析表明均为1-4连接~有少量的1-6连接~是分支较少的直链多糖.关键词库拉索芦荟;多糖;结构分析中图分类号O625文献标识码A文章编号0251-0790(2003)07-1189-04芦荟属百合科多年生草本植物~分布于热带及亚热带地区.目前已发现具药用价值的芦荟品种达50多种~医疗范围涉及内~外~妇~儿~皮肤及五官等各科~被誉为21世纪最有希望的保健食品

3、.芦荟所含多糖类是芦荟凝胶中主要活性物质~较多地存在于芦荟鲜叶汁中.芦荟多糖有多种功效[1*3]~如促进细胞再生软化~增强血管功能~防治癌症~艾滋病及提高免疫功能等.国内对芦荟研究较晚[4~5][6]从中国芦荟(AloeveraLvarChinensisBerger)中分离3种多糖~并测出其中两种~王蜀绣等多糖为B-(1-4)-D-甘露聚糖和B-(1-4)-D-葡甘聚糖~其中甘露聚糖有抗肿瘤和提高免疫功能等作用[6].由于芦荟的组成与含量随着生长环境~收获时间和采后处理方法不同会发生较大变化~因此本文首次对移植的长春库拉

4、索芦荟多糖进行分离纯化和结构研究~并建立了提取~分离和纯化方法并经红外~核磁~质谱和紫外等方法对分离物进行了表征~与同类文献[7*11]比较~本法更加准确~严谨~快速且具有广泛的应用价值.1实验部分1.1试剂与仪器库拉索芦荟(长春绿源公司提供);SephadexG-100(Pharmacia产品);碘甲烷及硼氢化钠(Sigma公司);其它试剂均为国产分析纯.AIPHA-CENTUARTFTIR型红外光谱仪(KBr压片);6890GC/5973MS联用仪(美国HP公司);BrukeAr400核磁共振波谱仪;紫外分光光度计(

5、UV-160~Shimadzu公司).1.2芦荟多糖含量的测定及分离纯化将新鲜芦荟去皮打浆~加热过滤~加入3倍95%的乙醇~除上清液~滤渣加5倍水~热水提取3次~加入活性炭趁热过滤~除色素等杂质~浓缩后~采用改良的苯酚-硫酸法[12]~以葡萄糖为标准品测得新鲜芦荟内胶中多糖含量为3.2mg/g.取新鲜芦荟洗净~剥皮~用0.5%次氯酸钠溶液浸泡8h后用二次蒸馏水清洗数次以消毒~打浆~于5以下冷藏保温.经过80目尼龙纱布粗滤~沙氏漏斗精滤~真空浓缩.分别用乙酸乙酯及丙酮进行索氏提取脱脂后~加95%乙醇分级沉淀~加乙醇至乙醇浓

6、度为50%~得沉淀PSA1和上清液S1;继续向上清液中加入乙醇至其浓度为80%~得沉淀PSA2和上清液S2.沉淀物真空干燥得粗多糖.粗多收稿日期:2002-07-23.基金项目:吉林省科技厅高技术基金(批准号:2001101)资助.联系人简介:闫吉昌(1943年出生)~男~教授~博士生导师~从事质谱分析研究.E-mail:yanjc012@nenu.edu.cn1190高等学校化学学报Vol.24糖依次用乙醇~丙酮及乙醚洗涤离心用木瓜蛋白酶法[13]及Saveg法[14]去除蛋白质.经~脱色2O2透析将透析溶液上Seph

7、adexG-100凝胶柱(2.5mm>30cm)用0.1mol/L及0.3mol/LNaCl分别洗脱合并各糖洗脱液蒸馏水透析过夜浓缩真空干燥得多糖纯品.1.3多糖的酶解将PSA1和PSA2多糖配制成2mg/mL溶液分别加入苦杏仁酶和麦芽糖酶在400C下水解40min再迅速加热使酶失活后真空干燥配成质量浓度为0.5%的乙醇溶液用纸层析检验是否有单糖存在.1.4多糖的单糖组成1.4.1薄层层析在PSA1和PSA2中分别加入2mol/LCF3COO~N2气保护下于100C水解8h重复3次.水解样与标准混合单糖样(葡萄糖~甘露糖

8、~木糖~半乳糖及鼠李糖)在G-60硅胶薄板展层[展层体系:V(乙酸乙酯)=V(甲醇)=V(乙酸)=V(水)=12=3=3=2]以苯胺-二苯胺-磷酸试剂喷雾烘干显色.1.4.2乙酰化GC/MS在多糖样PSA1和PSA2中分别加入2mol/LCF3COO~N2气保护在100C下水解8h重复3次.N2气吹干水解产物加NaO