抗体APC荧光素标记操作流程记录.doc

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1、1.目的规范单克隆抗体标记荧光APC(快速标记法）标准操作程序2.适用范围适用于本公司抗体标记荧光APC(快速标记法）操作3.术语和定义别藻蓝蛋白（allophycocyanin，APC）由藻蓝胆素与蛋白质结合而成，APC具有荧光性，伴随着非常高的光吸收和高量子效率。4.职责和权限实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。5.实验试剂.5.1溶液配制0.01mol/LPBS溶液配制0.01mol/LPhosphateBufferedSaline，pH7.40试剂名称配方量批号用量Water1LNaCl（MW58.44）0.799gKH2PO4（MW13

2、6.09）0.2gKCl（MW74.55）0.2gNa2HPO4·12H2O（MW358.14）2.89g调节pH7.40后，加水定容至1.0L，再调节pH至7.40，过滤备用。StorageBuffer，pH7.40试剂名称配方量批号用量0.01mol/LPBS/BSA0.5%NaN30.1%调节pH7.40后，加水定容至1.0L，再调节至pH7.40。1.1其他试剂试剂名称厂家批号活化液（modifier）淬灭剂（quencher）APC荧光素1.操作流程1.1抗体活化将抗体用0.01mol/LPBS稀释为1mg/mL，加入mL活化液(体积比为抗体

3、溶液：反应活化液=10:1），旋涡振荡器混匀后，室温避光反应10min。1.2与APC反应形成共轭物将抗体混合液（步骤6.1）加入mgAPC荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时，反应开始时间：至结束时间：；（或2-8度条件下避光过夜）。1.3荧光淬灭向共轭物（步骤6.2）中加入mL淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。淬灭开始时间：至结束时间：。1.4层析将共轭物（步骤6.3）层析柱分离，进一步去除游离的荧光素或抗体。1.5保存收集得到的标

4、记抗体（步骤6.4），上机测试后根据效价，用StorageBuffer按比例稀释后，4℃避光保存，有效期一年。