人绒促性素单克隆抗体的制备与分离纯化

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1、22中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics2010年第31卷第1期性分析实验表明,Citrostatin同时具有杀伤肿瘤细胞或者通过酰胺化增加Citrostatin的活性,达到更好的的功能,证明了Citrostatin同时具有抑制肿瘤新生血抑制肿瘤生长的目的,这有待下一步的研究证实。管的形成和直接杀伤肿瘤的双重活性。但与等摩尔参考文献:浓度的T8、citropin1.18比较,在细胞和血管水平,抑[1]O′ReillyMS,BoehmT,ShingY,etal.Endostatin:anendog

2、enousin2hibitorofangiogenesisandtumorgrowth[J].Cell,1997,88:2772285.制效果无明显差异,与化学合成的Citrostatin相比,[2]DoyleJ,BrinkworthCS,WegenerKL,etal.nNOSinhibition,antimi2[5]抗肿瘤活性也无明显差别。crobialandanticanceractivityoftheamphibianskinpeptide,citropin1.Citrostatin具有位于C端的citropin1.18序列,其1andsynthe

3、ticmodification[J].EurJBiochem,2003,270:11412带正电荷的极性氨基酸可与肿瘤细胞膜表层带负电1153.[3]WegenerKL,WabnitzPA,CarverJA,etal.Hostdefencepeptides荷的磷脂产生静电引力作用,使Citrostatin聚集于肿fromtheskinglandsoftheAustralianbluemountainstree2frogLitoria瘤细胞附近,而新生肿瘤组织的血管丰富,内皮细胞citropa.Solutionstructureoftheantibacte

4、rialpeptidecitripin1.1[J].数量较多,Citrostatin的浓度增加可增强对内皮细胞EurJBiochem,1999,265:6272637.的抑制作用。尽管细胞和血管水平只反映了Citro2[4]MaeshimaY,SudhakarA,LivelyJC,etal.Tumstatin,anendothelialcell2Specificinhibitorofproteinsynthesis[J].Science,2002,295:1402statin具有双功能的抗肿瘤活性,但真正有意义的工143.作须在活体水平证明Citrost

5、atin与单独使用cit2[5]马丽,杨生生,杨志峰,等.Citrostatin的构建与活性分析[J].第ropin1.18、T8相比,具有明显抑制肿瘤生长的优势,二军医大学学报,2006(11):124921253.人绒促性素单克隆抗体的制备与分离纯化111211沈泓,易喻,梅建凤,朱克寅,李敏,应国清(1.浙江工业大学药学院,浙江杭州310014;2.杭州博林生物技术有限公司,浙江杭州310018)摘要:目的制备人绒促性素(hCG)单克隆抗体。方法hCG抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按5∶1融合,间接ELISA法筛选阳

6、性孔,有限稀释法进行克隆化培养;制备腹水抗体;间接ELISA法测定抗体效价;采用HiTraprProteinAFF亲和色谱柱纯化抗体。结果得到2株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞-3-7株,细胞培养上清中抗体效价达10以上,腹水抗体效价达10以上,纯化后的单抗纯度达98%以上,回收率达75%。结论成功获得两株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,可用于早孕、肿瘤等诊断的研究。关键词:人绒促性素;单克隆抗体;杂交瘤细胞中图分类号:Q57;Q813文献标识码:A文章编号:100521678(2010)0120022204Preparationandpurific

7、ationofmonoclonalantibodiesagainsthumanchorionicgonadotrophin111211SHENHong,YIYu,MEIJian2feng,ZHUKe2yin,LIMin,YINGGuo2qing(1.SchoolofPharmaceuticalScience,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou310014,China;2.BIOLINKBiopharm,Co.,Ltd.,Hangzhou310018,China)收稿日期:2009209208基金项目:浙江省科技

8、厅项目(2009c33089)作者简介:沈泓(19832),女,浙江杭州人,硕士

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