生物技术实验—凝集反应

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1、生物技术实验—凝集反应免疫学教研室刘平凝集反应【实验目的】1．了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。【概述】在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。抗原特异性抗体特异结合电解质＋抗原抗体复合物凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。一、直接凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接

2、凝集反应。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。玻片凝集试验——ABO血型鉴定玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。【实验原理】人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其

3、凝集情况便可判定出受试者的血型。ABO血型的划分红细胞表面Ag血清中AbA型A抗BB型B抗AAB型A、B—、—O型—、—抗A、抗B【实验材料】1．ABO血型鉴定试剂盒　内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。2．一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75％酒精、灭菌棉签。3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结

4、果后把玻片放入消毒液中。【实验方法】1．取洁净载玻片1块，并标记（如图）2．将抗A、B分型试剂分别加1滴于标记有A、B的玻片两侧。AB抗A抗B【实验结果】二、间接凝集反应将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒间接凝集试验示意图原理载体种类及其处理方法红细

5、胞：新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒：可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒间接凝集抑制试验——妊娠试验【实验原理】可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏

6、乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试验阴性。间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体特异结合抗原抗体复合物NS＋致敏颗粒无凝集颗粒阳性间接凝集抑制试验待测抗原已知抗体无结合抗原抗体分散NS＋致敏颗粒有凝集颗粒阴性【实验材料】1．妊娠诊断试剂盒：内含抗血清（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏）各一支2．1号尿、2号尿。3．有格玻片和毛细吸管等。【实验方法】1．在玻片的第1、第2内分别加1滴1号尿、2号尿。2．每格内加入妊娠诊断试剂抗血清1滴。轻轻摇动1~2min使其充分混匀。3．每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动玻片3~5min后观察结果，记录各标本有无凝集现

7、象。【实验结果】孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集，妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试验阴性。待检尿若为乳状液，妊娠试验阳性；若出现凝集，则妊娠试验阴性。12孕妇尿正常尿【注意事项】1．试验所用诊断试剂用前应充分摇匀，而且应在有效期内使用。2．加样用的滴管及混匀用的牙签不能共用。3．加样不宜太多，玻片应始终保持水平，以防两格之反应液相混。【实验思考】1．记录血型鉴定试验、乳胶妊娠诊断试验的材料、方法及结果判定（可用图示或表格方式表示）。2．直接凝集试验与间接凝集试验有何不同？3．在各凝集试验中都设有

8、相应对照，有何意义？若对照出现异常如何分析及解决？