ERK途径对肝癌BEL-7402细胞增殖和迁移的影响-论文.pdf

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1、肿瘤2013年11月第33卷第11期TUMORVo1．33，November2013www．tumorsci．org947DOI：10．3781~．issn．1000—7431．2013．11．002Copyright◎2013byTUMOR基础研究·BasicResearchMiR-21通过AKT／ERK途径对肝癌BEL一7402细胞增殖和迁移的影响包龙龙，严妍。，季卫丹。，沈舒文。，吴孟超，苏长青。1．苏州大学医学部基础医学与生物科学学院遗传学系，江苏苏州215123；2．第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤研究室，上海200438【摘要】目的：探讨微小RNA一2

2、1(microRNA一21，miR一21)对人肝癌BEL一7402细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法：将携带增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein，EG)基因的miR一21表达载体pGL3一miR21一EGFP瞬时转染BEL一7402细胞，实时荧光定量一PCR检测细胞中miR一21的表达水平，蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化蛋白激酶B[phospho—proteinkinaseB，P—PKB(又称p-AKT)1、磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho—extracellularsignal—regulatedk

3、inase，p-ERK)的表达，MTT法检测miR一21过表达对BEL一7402细胞增殖的影响，细胞划痕和Transwell小室法检测miR一21过表达对BEL一7402细胞迁移和侵袭能力的影响。将pGenesil—shAKT载体转染BEL一7402细胞，实时荧光定量PCR检测细胞中miR一21的表达，蛋白质印迹法检测细胞中AKT和p-AKT的表达水平，MTT法和细胞划痕实验检测pGenesil—shAKT对BEL一7402细胞增殖和迁移的影响。结果：与空白对照组(未转染质粒的BEL一7402细胞)相比，pGL3一miR21一EGFP转染后，BEL一7402细胞中mi

4、R一21的表达水平明显上调(P<0．01)，p-AKT和P—ERK的表达水平同时上调(P<0．05)；与空白对照组相比，miR一21的过表达明显促进了BEL一7402细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(P<0．05)。pGenesil—shAKT转染BEL一7402细胞后，伴随着AKT和p-AKT表达水平的下调，细胞的增殖和迁移能力均明显下降(P<0．05)，而细胞中miR一21的表达水平无明显变化。结论：MiR一21可能通过AKT／ERK信号通路促进BEL一7402细胞的增殖和迁移。【关键词】肝肿瘤；细胞增殖；细胞运动；肿瘤侵润；微RNAs【中图分类号】R735．7【文献

5、标志码】A【文章编号】1000—7431(2013)11—0947—07EfectofmiR-21ontheproliferationandmigrationofhumanhepatomaBEL一7402cellsthroughAKT／ERKpathwayBAOLong-long。，YANYan，JIWei—dan，SHENShu—wen，WUMeng—chap，SUChang—qing。’1．DepartmentofMedicaIGenetics。SchoolofBiology＆BasicMedicaISciencesofSoochowUniversity，Suzh

6、ou215123，JiangsuProvince，China；2．DepartmentofMolecularOncology，EasternHepatobiliarySurgicalHospital，SecondMilitaryMedicalUniversity，Shanghai200438，China[ABSTRACT]Objective：Toinvestigatethee仟ectsofmiR一21ontheproliferation．invasionandmigration0fhumanhepatomaBEL一7402cellsandexPIorethepossi

7、bIemechanism．Methods：MiR一21over—expressionvectorpGL3一miR21一EGFP(enhancedgreenfluorescentprotein)wastransfectedintoBEL一7402cells．TheexpressionleveIofmiR一21wasdetectedbyreal—tlmefluorescencequantitative—PCRandtheexpressionlevelsofphospho—AKT(p-AKT)andphospho—extracelIuIarsignalre