ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响-论文.pdf

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1、342·JSurgConceptsPract2014，Vo1．19，No．4．论著．ShRNA靶向沉默FGFR3基因对人肝癌细胞Huh7增殖和迁移的影响李科，杨卫平，付志平，汪炳瑞，景晓乾，沈柏用，彭承宏，邱伟华f上海交通大学医学院附属瑞金医院外科上海消化外科研究所，上海200025)[摘要】目的：研究成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)对肝癌细胞株Huh7增殖和迁移能力的影响。方法：以靶向沉默FGFR3的shRNA慢病毒表达载体、deha8．9和VSVG三质粒共转染293T细胞来包装慢病毒颗粒。选择Huh7细胞转导慢病毒载体

2、。通过细胞增殖实验(CCK8法)和transwell实验，分别评估沉默FGFR3对Huh7肝癌细胞增殖和迁移能力的影响裸鼠分别皮下注射pSilencer-FGFR3．shRNAI#组和pSilencer-NC组Huh7细胞后，监测肿瘤生长。Western印迹法检测下游信号蛋白D—AKT和P—ERK。结果：与NC组比较．RNAi组的细胞增殖能力显著下降(尸<0．01)，裸鼠皮下移植瘤体积较小【shRNA1#组：f210．2~94．6)mill，NC组：(1546．0_+331．7)mm。，P

3、NAI#组：(6．3~1．2)个，shRNA2#组：(3．O±0．5)个，NC组：(36．7±4．4)个，P<0．001]。RNAi组p-ERK和p-AKT的蛋白质表达水平显著下降。结论：沉默FGFR3，可能通过抑制ERK和AKT通路，显著降低肝癌细胞的增殖和迁移能力。关键词：肝细胞癌；FGFR3基因；shRNA；增殖；迁移中图分类号：R735．7文献识别码：A文章编号：1007—9610(2014)04—0342．07D0I：10．39691i．issn．1007．9610．2014．04．015EfectofFGFR3gen

4、esilencedbyshRNAonproliferationandmigrationofhumanlivercancerHuh7cellLIKe，YANGWeiping,FUZhiping,WANGBingrui，JINGXiaoqian,SHENBaiyong,PENGChenghong,QIUWeihucaDepart—mentofSurgery,ShanghaiInstituteofDstiveSurgery,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicin

5、e，Shanghai200025，China[Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectofFGFR3ontheproliferationandmigrationinlivercancercelllinesHuh7．MethodsShRNAlentiviralexpressionvectorstargetinghumanFGFR3wereconstructedandCO—transfectedinto293Twithdeha8．9andVSVGtopackagelentivirusparti

6、cles．Huh7cellsweretransducedwiththeconstructedlentiviralvectors．TheeffectofFGFR3oncellproliferationandmigrationwasinvestigatedbyCCK一8assayandtranswellassay．Huh7cellstransfeetedwithpSilencer—FGFR3一shRNAI#andpSilencer-NC(negtivecontro1)weresubcutaneouslyinjectedintonud

7、emicerespectively．Tumorgrowthwasmonitored．Theexpressionofp-AKTandp-ERKinHuh7cellsweredetectedbyWesternblot．ResultsComparedwithnegativecontrolgroup(NC)，theproliferationinRNAigroupswassignificantlysuppressed(尸

8、．2~94．6)mm，NC：(1546．0~331．7)mm，P<0．05]；theabilityofmigrationwasalsosignificantlysuppressed[shRNAI#：(6．3±1．2)，shRNA2#：(3．0±0．5)，NC：(