对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤大鼠血浆miR-122表达的变化-论文.pdf

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1、·854·中国药理学与毒理学杂志2013年10月第27卷第5期ChinJPharmacolToxicol，Vol27，No5，Oct2013对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤大鼠血浆miR一122表达的变化王雁，汤纳平，富欣，殷承胜，季龙凤，杨琛懋，黄欢夏，马琛(中国医药工业研究总院国家上海新药安全评价研究中心，上海201203)摘要：目的探讨血浆微RNA(miR)-122在药物性肝损伤中的变化及其在肝毒理临床前评价中的作用。方法SD雄性大鼠单次ig给予对乙酰氨基酚0，625和1250mg·kg_。，并于给药后1．5，3，6，12，24，36及96h采集血样。以乙酰氨基酚诱导急性肝损伤大鼠血浆

2、中稳定表达的miR-103为校正基因，实时定量逆转录PCR(RT-qPCR)法检测不同时间点大鼠血浆miR一122的表达。测定血浆中不同时间点谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)和肝组织病理学检查。结果组织病理学观察结果显示，与正常对照组相比，大鼠分别ig给予对乙酰氨基酚625mg·kg1．5和3h后，肝组织病理无明显变化，给药后6和12h，肝腺泡Ⅲ带出现明显的空泡样变性和肝窦充血，给药后24h肝腺泡IIl带有明显的细胞坏死；而36h时基本恢复正常；而对乙酰氨基酚1250mg·kg组给药后24和36h时肝腺泡Ⅲ带有明显的细胞坏死。与正常对照组相比，大鼠分别ig给予对乙酰氨基酚625

3、和1250mg·kg后12和24h，血清GPT和GOT均有显著性升高(P<0．05)，且对乙酰氨基酚1250mg·kg组大鼠血清GPT活性均是对照组2倍以上。与正常对照组相比，血浆miR-122在大鼠给予对乙酰氨基酚1250mg·kg1．5h即升高3．6倍(P<0．05)，并且持续升高，12h达峰值后开始下降，96h恢复正常水平；大鼠给予625mg·kg对乙酰氨基酚给药后6h，血浆miR一122升高5．2倍，12h达峰值后开始下降，36h恢复正常水平。肝损伤大鼠血浆miR-122不同时间点的表达水平与肝损伤GPT和GOT变化相似。结论循环miR-122可能成为药物性肝损伤临床前和临床早期

4、检测的理想的血液学分子标志物。关键词：对乙酰氨基酚；肝损伤；miR-122；动力学中图分类号：Q7，R971．1文献标志码：A文章编号：1000-3002(2013)05-0854-06DOl：10．3867／j．issn．1000-3002。2013．05．015药物诱导的肝损伤是终止药物研发和撤市的主而不能被推广。微RNA(microRNA，miR)分子可要原因之一_1I2J。近60年以来，评价药物性肝损伤以在体液循环中稳定存在J，从而为miR作为非侵和区分不同类型肝损伤的指标主要是依据对血液中袭性生物标志各种疾病的预防和诊断方面的应用奠酶的检测，如广泛使用的丙氨酸氨基转移酶(glu

5、-定了基础。tamicpyrurictransminase，GPT)和天冬氨酸氨基miR一122是较早被发现且研究较为详细的一种转移酶(glutamicoxaloacetictransminase，miR。2002年，Lagos-Quintana等通过对成年小GOT)。但这些指标在肝外损伤如骨骼肌损伤、肠鼠各种组织细胞中多种miR系统克隆和测序以及胃损伤中也能检测到升高I4J，其结果并不总是与进一步鉴定，发现miR一122仅在肝组织细胞中表达组织病理学检测结果一致J。随着高通量分子生且是肝细胞中表达量最高的miR，进一步研究证明，物学技术发展，新的肝损伤生物标志物被报道，比如循环miR一

6、122在药物诱导的肝损伤中要早于传统对氧磷酶1，血清F蛋白等J，但均因技术局限指标升高且能有效区分肝损伤与肝外损伤。。”]，并且其定量检测技术实时定量逆转录PCR基金项目：国家科技重大专项(2012ZX09302002)；国(RT—qPCR)检测范围广、重复性好和灵敏度高，但家科技重大专项(2012ZX09505-001-003)；国家自然科学是，目前一些文献报道循环miR相对定量普遍使用基金(81273603)的被认为表达恒定的管家基因会随着实验条件、样品作者简介：王雁(1986一)，女，硕士研究生，主要从类型等不同而表达不稳定伯]，因此，使用适合不同事肝分子毒理学研究，Tel：188

7、01969892，E-mail：实验条件的稳定内参基因对于RT—qPCR获得准确hanyan20061123@126．com；马琛(1963一)，女，研究员，博士，博士生导师，主要从事药物毒理学研究。结果非常重要。通讯作者：马琼，E—mail：jma@ncdser．com，Tel：本实验使用前期工作筛选的在大鼠急性肝损伤(021)50801763血浆中稳定表达的内源性校正基因miR一103l1，中国药理学与毒理学杂志2013年10月