乙酰氨基酚对大鼠急性肝损伤的诱导作用

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1、乙酰氨基酚对大鼠急性肝损伤的诱导作用　　药物经体内代谢通常会引起损伤，对乙酰氨基酚（扑热息痛）是乙酰苯胺类解热镇痛药，是医学临床常用的解热镇痛药物之一。其常规剂量用药安全可靠，但在大剂量应用则可引起动物和人严重肝肾损伤，甚至死亡[1-2].孙大庆等[3]指出残留的抗微生物药对人体可产生多种直接和间接危害，甚至免疫力降低过敏反应和细菌耐药性等毒害作用。可见了解药物代谢机制可为更好地合理用药提供依据。对乙酰氨基酚在体内主要由细胞色素P450酶家族成员CYP2E1酶代谢，且可影响CYP2E1的酶活性[3],从而加重其对肝脏的损伤。目前都以活体动物为研究对象，通过检测血清及肝组织匀浆中肝功能

2、指标的变化，来揭示肝损伤的程度。姚光弼等[5]研究证实对乙酰氨基酚可引起GSH含量降低，MDA升高。因此实验通过检测肝损伤有关的六种酶来探索对乙酰氨基酚诱导大鼠急性肝损伤作用，也可为深入研究对乙酰氨基酚对CYP2E1的诱导作用奠定了基础。　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1药品与试剂　　对乙酰氨基酚，批号：D1301026购自sigma公司；谷草转氨酶（AST,批号：2013017）、谷丙转氨酶（ALT,批号：2013034）、碱性磷酸酶（ALP,批号：2013001）、超氧化物歧化酶（SOD,批号：20140311）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX,批号：20140312

3、）、（丙二醛MDA,批号：20140310）、总蛋白测定试剂盒（批号：20140319），均购自南京建成生物工程研究所。　　1.1.2实验动物　　实验用雄性Sprague-Dagkg-1）、中（150mgkg-1）、高（250mgkg-1）剂量组，每组15只。采用皮下注射给药，对照组给予生理盐水，给药后1、6、24h,各组随机取5只大鼠，检测各项指标。　　1.2.2指标检测大鼠固定后，断头取血，置于含有抗凝剂的试管中，3500rmin-1离心5min,上清即为血浆，-20℃保存待检。同时，迅速剖取肝脏，冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后，称取湿重0.3g左右，加入预冷的生理盐水，冰水中制成1

4、0%匀浆，4℃6000rmin-1离心5min,提取上清液，-20℃保存待检。其中AST、ALT:2,4-二硝基苯肼法，ALP:磷酸苯二钠比色法，SOD:黄嘌呤氧化酶法，MDA:硫代巴比妥酸法（TBA），GSH:DTNB改良比色法。所有酶的检测均按照试剂盒说明书方法操作。　　1.2.3数据处理实验的计量数据均以x軃±S表示。采用SPSS11.5统计软件处理，组间比较采用单因素方差分析（ANOVA），多个样本均数之间的多重比较用Post-HocLSD法。　　2结果　　2.1血浆中AST、ALT和ALP的变化。　　实验组大鼠血浆AST和ALT活性与对照组比较，中、高剂量组均

5、明显升高，且高剂量组（P<0.01）差异极显着，中剂量组（P<0.05）差异显着，低剂量组无显着变化（见图1和图2），说明中、高剂量组引起细胞损伤导致血浆转氨酶升高，且高剂量组比较严重引起急性损伤；ALP活性与对照组比较，高剂量组24h显着降低（P<0.05），低、中剂量组先升高后趋于正常，说明ALP在药物剂量最大且作用时间最长时引起肝脏轻微胆汁淤积损伤（见图3）。　　2.2肝组织中SOD、GSH和MDA的变化。　　实验组大鼠肝组织的SOD活性与对照组相比总体都降低，高剂量组显着降低（P<0.05），中剂量组随时间延长而逐渐降低（P<0.05），低剂量组

6、无显着变化（P>0.05）（见图4）。GSH含量与对照组比较，三个剂量组都降低，中、高剂量组差异极显着（P<0.01）；低剂量组差异显着（P<0.05），且随时间先降低后恢复正常（见图5）。SOD与GSH的显着降低，表明对乙酰氨基酚降低了机体抗氧化能力，从而引起肝组织氧化应激。故实验检测MDA含量来反映脂质过氧化损伤程度，其结果与对照组比较，中、高剂量组显着升高，差异极显着（P<0.01）或差异显着（P<0.05），低剂量组则无显着变化（P>0.05）（见图6）。同时所测指标值见表1、2、3（表中A、B、C分别代表低中高药物剂量组）。　　3讨论　　

7、对乙酰氨基酚进入体内经肝细胞色素P450酶代谢后，生成的毒性中间产物N-乙酰苯醌亚胺（NAPQI），其与肝脏内还原型谷胱甘肽（GSH）结合，以无毒形式从尿中排出。但当对乙酰氨基酚剂量过大时，未被结合的NAPQI与肝细胞大分子共价结合，引起肝细胞坏死，细胞通透性增强，使转氨酶释放入血，从而造成血浆转氨酶升高[6].因此，检测血浆转氨酶可间接表明肝损伤程度。实验结果表明，对乙酰氨基酚中、高剂量组大鼠的AST和ALT值显着升高，表明肝细胞线粒体损伤严重。同时AL