内质网应激在D-氨基半乳糖／脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭中的作用-论文.pdf

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1、·364·中华肝脏病杂~2014年5月第22卷第5期ChinJHepatol，May2014，0l：!：内质网应激在D一氨基半乳糖／脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭中的作用任锋杨丙章张向颖温韬王欣欣殷继明朴正福郑素军张晶陈煜陈德喜aCf-~【摘要】目的研究内质网应激在D一氨基半乳糖／脂多糖联合注射诱导小鼠急性肝衰竭致病机制中的作用。方法以C57BL／6小鼠为研究对象，腹腔注射D一氨基半乳糖／脂多糖建立小鼠急性肝衰竭模型。动物分为对照组、急性肝衰竭模型组、4_丁酸苯酯干预组(建模前6h腹腔注射)。Westemblot方法检测肝组织内质网应激标志物蛋白表达水平，检

2、测血清ALT、AST水平评价肝脏功能，观察肝脏组织病理学变化评价肝脏损伤情况，实时荧光定量PCR检测肝细胞炎症因子如肿瘤坏死因子(TNF)0【、白细胞介素(IL)_15和IL_1D基因表达情况，凋亡细胞原位末端转移酶标记试验法检测肝细胞凋亡情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，两样本均数比较采用成组设计f检验l对于小鼠的生存分析，应用两两比较的Logrank检验。结果Westernblot方法结果显示，内质网应激蛋白标志物葡萄糖调节蛋白78和葡萄糖调节蛋白94随着急性肝衰竭的进展表达水平逐渐升高；非折叠蛋白反应蛋白1型内质网跨膜蛋白激酶1仅、X盒结合

3、蛋白1、活化转录因子6在急性肝衰竭早期被激活，而内质网应激诱导的凋亡蛋白CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白和caspasel2在急性肝衰竭晚期表达升高。4一丁酸苯酯抑制内质网应激可显著改善肝炎症【A【：(1227．7±301．1)U／L与(727．5-4-412．5)U／L，P<0．05；AST：(1682．9-4-580．2)U／L与(744．9土267．5)U／L，P<0．o51，并且抑制炎症因子的表达(TNFo【：1．55士0．47与0．63±0．20，P<0．05；IL-1D：7．39±2．O3与4．51±1．4，尸<0．05；IL-6：0．4

4、3±0．14与0．18±0．03，尸<0．05)；凋亡细胞原位末端转移酶标记试验和Westemblot方法研究结果表明，4_丁酸苯酯干预内质网应激可显著抑制肝细胞凋亡，并降低了剪切型caspase3表达。结论内质网应激在D一氨基半乳糖／脂多糖诱导小鼠急性肝衰竭过程中承担着关键作用，抑制内质网应激通过降低炎症反应和肝细胞凋亡从而改善肝损伤。【关键词】肝功能衰竭，急性；脂多糖类；炎症；内质网应激Roleofeadopl~mierelkulumstress~／LPS-indueedacuteliverfailureRenYangBingzhang嗍WenTa

5、o,WangWmxi~YmJimingPiaoZhengfu,~nengSujun,ZhangJing,ChenChenDexi,Dl蜊刀I明InstitateofHepatolo~,BeijingYou"anHospital,CapitalMedicalUniversi~,Beifng100069,China伽幽曙倒Dl删绷Email：duan2517@163．comIA~rmlObjectiveTostudytheroleofendoplasmicreticulumstress(ERS)inacuteliverfailure(ALE)usingam

6、ousemodelofD-Galactosamine／lipopolysaccharide(D-GalN／LPS)-inducedALF．MethodsTheALFmodelwasestablishedbyadministeringintmperitoneal(i．p．)ectionsofD—GaIN(700mg／kg)andLPS(10~g／kg)tosixC57BL／6mice．Threeofthemodeledmicewerealsoadministered4-phenylbutyrate(4-PBA；100mg／kgi．p．)at6hoursb

7、eforetheonsetofALFandservedastheinterventiongroup．Non-modeledmiceservedasconlrols．AllmicewereanalyzedbywesternblottingandqRT-PCRtodeterminetheexpressionlevelsofDOI：10．3760／cma．j．issn．1007—3418．2014．05．009基金项目：国家“十二五”科技重大专项(2012ZX10002004-006、2012ZX10004904—003—001、20l3zXl0002002

8、—006—001)；国家自然科学基金(81270532)，北京市优秀人才培养资助项目(2011