沙棘多糖对小鼠急性肝衰竭的保护作用及机制研究

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1、内蒙古农业大学研究生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包括其他^已经发表或撰写过的研究成果，也不包括为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。日期：2014．06．10内蒙古农业大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解内蒙古农业大学有关保护知识

2、产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属内蒙古农业大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为内蒙古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为内蒙古农业大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，采用影印、缩印或其他手段保存论文。．氐p论文僦名：达毯指导教师签名：矽专》=距。。1日期：2014．06．10摘要本文研究了沙棘多糖对小鼠急性肝衰竭的保护作用，

3、同时对其保护机制进行了探讨，为研究沙棘多糖的保肝作用提供科学的依据。采用水提醇沉法提取沙棘多糖，经过Sephadex凝胶层析纯化沙棘多糖。对纯化后的沙棘多糖的纯度和单糖组成进行了检测。利用紫外光谱扫描和高效液相色谱鉴定了沙棘多糖的纯度，结果显示纯化后的沙棘多糖为成分均一的多糖物质。通过高效液相色谱法测定沙棘多糖中单糖的组成，结果显示，沙棘多糖主要由5种单糖构成，它们是Man、Rha、Glu、Gal和Ara，它们在沙棘多糖中的百分含量为12．73％、5．86％、26．71％、6．30％、48．4l％

4、，摩尔比为2．02：1．02：4．24：l：9．22。采用LPS／D—GaIN联合诱导的小鼠急性肝衰竭模型，研究沙棘多糖的保肝作用。120只雄性C57BL／6小鼠随机分为六组：正常对照组、模型组、地塞米松阳性对照组、沙棘多糖低、中和高剂量组。沙棘多糖低、中、高剂量组分别以50、100和200mg·kg。沙棘多糖灌胃14天。通过腹腔注射LPS(1099．kgo)和D—GaIN(700mg·kgo)建立急性肝衰竭模型，阳性对照组腹腔注射地塞米松(10mg·kg‘1)。建模4h和8h后采集血清和和肝脏组

5、织，检测ALT、AST、SOD、GSH．PX的活性和MDA的含量。通过病理学观察肝脏组织学变化。通过ELISA检测血清中TNF一0【和IL．1p的表达量。通过免疫组织化学法测定肝脏内TLR4、P．ERK、NF．KB、PPAR．T的表达。通过WesternBlot检测肝脏中P．ERK、P．p38MAPK、P．JNK、SOCS3的表达。结果表明，沙棘多糖显著地抑制了肝衰竭小鼠血清ALT和AST活性(P<0．0l，P<0．05)：促进了血清和肝脏SOD和GSH．PX活性升高(P<0．01，P<0．05)

6、、抑制了MDA的产生(P<0．01)。病理学观察表明，沙棘多糖明显减轻炎症反应造成的肝脏组织细胞损伤。血清TNF．。c和IL．1p的表达在沙棘多糖组也显著降低(P<0．01)。进一步检测发现，沙棘多糖抑制了TLR4的表达，也抑制了ERK、p38MAPK、JNK的磷酸化，抑制了核内NF一1cBp65的表达，同时发现沙棘多糖并未影响SOCS3和PPAR—Y的表达。因此我们推测，沙棘多糖通过调控TLR4．MAPK—NF．KB信号通路起到抗氧化和抗炎作用，缓解了LPS／D—GalN诱导的小鼠急性肝衰竭。关

7、键词：沙棘多糖：内毒素；D．氨基半乳糖：急性肝衰竭；地塞米松StudyontheProtectiveEffectsandMechanismofSeabuckthornPolysaccharideonAcuteLiverFailureinMiceAbstractThispaperstudiestheprotectiveeffectsandmechanismofseabuckthornpolysaccharidesonmicewithacuteliverfailureinordertoprovides

8、cientificbasisforthehepatoprotectiveeffectsofseabuckthornpolysacchafides．Seabuckthornpolysaccharideswasextractedbythemethodsofwaterextractandalcoholprecipitation，andpurifiedbySephadexgelchromatographY．Wetestedtheputityandmonosaecharidecomposit