一母系遗传非综合征耳聋家系的线粒体DNA突变分析-论文.pdf

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1、第35卷第2期淮北师范大学学报(自然科学版)V01．35NO．22014年6月JournalofHuaibeiNormalUniversity(NaturalScience)Jun．2014一母系遗传非综合征耳聋家系的线粒体DNA突变分析耿雪侠，戴欣，程瑞雪，王亚玲，张海军(淮北师范大学生命科学学院，安徽淮北235000)摘要：在问卷调查及家系随访的基础上，在安徽省淮北市收集到一母系遗传非综合征耳聋家系，利用聚合酶链式反应一限制片段长度多态性分析(PCR—RFLP)和测序技术，检测了该家系成员线粒体D

2、NA(mtDNA)上可导致非综合征耳聋的两个突变热点处(12SrRNA基因上的1555位点和tRNASer基因上的7445位点)的碱基变化，发现该家系所有母系成员的mtDNA上都有A1555G同质型突变，但7445位点无异常；进而对该家系两个表型明显不同母系成员(一例具有先天性耳聋表型，另一例听力正常)的mtDNA进行全长测序，结果未在mtD—NA上发现除A1555G以外的其他位点突变，只发现了27处多态性序列变化，且两成员的mtDNA无序列差异．说明mtDNA上的A1555G同质型突变是该家系部分母

3、系成员致聋的分子生物学基础之一；推测该家系A1555G突变携带者临床表型的差异可能与mtDNA多态性无关，而更可能是核修饰基因与A1555G突变协同作用的结果．关键词：非综合征耳聋；线粒体DNA；突变分析中图分类号：R764文献标识码：A文章编号：2095—0691(2014)02—0050—06耳聋是严重危害人类身心健康的常见疾病之一，也是语言学习及交流的最大障碍⋯．其发病原因比较复杂，据统计，50％一70％的耳聋与遗传因素有关n．已有资料显示，药物致聋是我国成人后天性耳聋和新生儿先天性耳聋的主要原

4、因之一_3]．自1945年氨基糖甙类抗生素(Aminolycosideantibiotics，AmAn)问世以来，其副作用就一直是全世界医务人员的关注焦点．我国学者邱维勤1991年首次发现并提出氨基糖甙类抗生素诱导的药物性耳聋(AminoglycosideAntibiotic—InducedDeafness，AAID)有遗传易感性，且为母系遗传，即线粒体遗传．A1555G是最早发现、最常见的与AAID和母系遗传非综合征耳聋(Nonsyndromichearingloss，NSHL)相关的人类线粒体DN

5、A(MitochondrialDNA，mtDNA)突变]．但A1555G突变携带者的临床表型差异很大]，而表型上的不同可能与除氨基糖甙类药物以外的环境因素、线粒体DNA其他位点的突变(A7445G、G7444A等)或其单倍型、核修饰基因等有关，而更可能是遗传与环境相互作用的结果．2011年3月，在问卷调查及随后的家系随访工作中，我们在淮北地区发现一母系遗传非综合征耳聋家系．为阐明该家系部分成员耳聋发病的分子机理，我们采用聚合酶链式反应一限制性片断长度多态DNA分析(PCR—restrictionfra

6、gmentlengthpolymorphism，PCR—RFLP)和测序技术对该家系16例母系成员及其他家系成员mtDNA上的1555和7445位点(包括7444位点)进行了筛查；在确认所有母系成员线粒体1555位点均存在A—G同质型突变的基础上，对两例l临床表型明显不同母系成员的线粒体基因组进行全长PCR扩增和测序，以期寻找线粒体基因组中是否有可影响1555位点临床表型的其他位点突变．收稿日期：2014—02—21基金项目：国家自然科学基金项目(31370470)；安徽省自然科学基金项目(12080

7、85MC45)；安徽省高校青年教师科研资助计划项目(2006jq1141zd)作者简介：耿雪侠(1970一)，女，安徽萧县人，硕士，讲师，研究方向为人类遗传学．通讯作者：张海军(1971一)，男，安徽萧县人，博士，教授，研究方向为人类遗传学．第2期耿雪侠等：一母系遗传非综合征耳聋家系的线粒体DNA突变分析5l1材料与方法1。1家系调查调查方式：在问卷调查的基础上，进行家系随访．详细询问家系成员的病史，包括耳聋发病年龄、用药史(包括用药病因、药名、剂量等)、噪声接触情况、其他病史、有无近亲婚配等．1．2

8、引物根据人类线粒体标准序列n及有关文献n设计两对引物分别对应于筛查A1555G和A7445G(包括G7444A)mtDNA突变．表1筛查A1555G和A7445G(包括G7444A)mtDNA突变的PCR引物Table1PCRprimersusedtoscreentheA1555GandA7445GmtDNAmutations根据人类线粒体剑桥标准序列(CambridgeReferenceSequence，CRS)及有关文献设计n，可覆盖人类线粒体DNA