小干扰RNA下调Notch2对肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响-论文.pdf

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1、·354中华肝脏病杂志2014年5月第22卷第5期ChinJHepatol，May2014，Vo1．22，No．5肝癌小干扰RNA下调Notch2对肝细胞癌HepG2细胞增殖的影响李建芳丁世雄应丽萍胡爱荣胡耀仁梁晓岳【摘要】目的研究小干扰RNA(siRNA)干扰Notch2对HepG2细胞增殖的影响。方法用siRNA干扰HepG2细胞中Notch2基因，用RT-PCR检测siRNA干扰后Notch2mRNA与下游靶基因HeslmRNA的表达水平，用Westernblot方法检测Notch2蛋白的改变情况，然后

2、用CCK8法测定HepG2细胞增殖情况，用析因设计的方差分析和组间t检验进行统计学比较。结果肝细胞癌HepG2细胞中Notch2mRNA高表达，Notch2-siRNA干扰抑制后，HepG2细胞的Notch2mRNA和蛋白水平下调，下游Hesl的mRNA表达水平降低。HepG2细胞在Notch2-siRNA处理组12、24、48、72h和96h的增殖抑制率分别为2．64％±16．2、38．34％士8．80"／0、70．05％士7．80％、70．78％±10．00％和74．22％土4．80％，对照组siRNA处

3、理的细胞增殖抑制率分别为一0．2l％土3．65％、11．61％±10．66％、22．11％±7．93％、7．64％±10．00％和4．18％土7．64％，两组比较，F=5．48，JP<0．01，差异有统计学意义。与对照组相比，24h后增殖差异均有统计学意义(t值分别为3．405、7．473、7．749和13．460，尸值均<0．05)。结论Notch2在体外培养的肝细胞癌HepG2细胞中高表达，下调Notch2可以减缓HepG2细胞的增殖，为Notch2的靶向干预作为肝细胞癌的治疗提供了有价值的实验依据。【关

4、键词】癌，肝细胞；细胞增殖I受体，NotchEfectofsiRNA-mediatedsilencingofNotch2onproliferationoftheHepG2humanhepatocellular~~-'~inom8cellsLiJianfang*,OingShixiong,YingLiping,HuAirong,HaYaoren,LiangXiaoyue．TheSecondPeople"sHospitalofNingbo,Ningbo315014ChinaCorrespondenceauthor

5、：DingShixiong,Email：sxdin~ohu．com[Abstract]ObjectiveToexploretheefectofsilencingtheNotch2genebysmallinterfering(si)RNAontheproliferationofthenep62humanhepatocellularcarcinomaflCC)cells．MethodsNotch2一siRNAwastransfeetedasaliposomalformulationintoHepG2cells．T

6、henon-HCCcelllinesSG07901(gastriccancer)andSW620(coloncancer)wereusedascontrols．ThemRNAexpressionofNotch2andHes1weredetectedbyRT-PCR，andtheproteinexpressionofNotch2wasdetectedbywesternblotting．Theproliferationoftransfectednep62cellsWasassessedbythecellcount

7、ingldt-8(CCK8)colorimetricassay．ResultsTheunU~lsfectedHel~2cellsshowedsignificantlyupregulatedWanscriptexpressionofNotch2，andnotofNotchl，Notch3orNotch4,compared~theothernon-HCCcellines．FoUowing~nsfectionofNotcb2-siRNAintoHepG2cells，themRNAexpressionofNotch2

8、卸ndHeslandthe啦由expressionofNotch2weresignificantlyd~eased．Theratesofproliferationintfoifioninnep62followingiransfeclionofNotch2-siRNAshowedanincreasingtime-relatedtren0,with2．64％4-16．20％at12h38．34％4-8．