RNA干扰下调SOX9表达抑制肝癌细胞的增殖-论文.pdf

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1、404WWW．tumorsci．org肿瘤2014年5月第34卷第5期TUMORVo1．34，May2014DOh10．3781~．issn．1000—7431．2014．05．003Copyright~2014byTUMOR基础研究·BasicResearchRNA干扰T~JSOX9表达抑制肝癌细胞的增殖罗琴，杨欣荣。，汪宁，顾帝水，胡方园，樊嘉，覃文新1．上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室，上海200032；2．复旦大学上海医学院附属中山医院肝癌研究所癌变与侵袭原理教育部重点实验

2、室，上海200032【摘要】目的：分析转录因子性别决定区Y框蛋白9(sex—determiningregionYboxprotein9，SOX9)在肝癌组织中的表达情况，并探讨其对肝癌细胞增殖的调节作用及分子机制。方法：分析肝癌表达谱芯片数据中SOX9的表达情况，并采用实时荧光定量PCR法在32对肝癌组织及癌旁肝组织中进行验证。构建靶向干扰SOX9的慢病毒载体DGm。nPuroTM—SOX9一shRNA，并用慢病毒感染的方法转入肝癌细胞Huh7中；采用实时荧光定量一PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9的干扰效果。采用CCK一8

3、(cellcounfingkit一8)法、克隆形成实验、FCM法和衰老相关p半乳糖苷酶(senescence-associatedbeta-ga1t。。id。，SA一Ga1)染色等方法检测细胞的增殖能力和衰老情况。最后，采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9可能调节的下游基因。结果：肝癌表达谱芯片数据分析结果显示，SOX9在肝癌组织中高表达(P<0．0001)，并在32对配对的肝癌组织及癌旁肝组织中得到验证(P=0．0095)。靶向干扰Hh7细胞中SOX9的表达可抑制细胞的增殖并促进衰老。SOX9表达下调可降低增

4、殖细胞核抗原(proliferatingcellnuc1earantigen，PCNA)、细胞周期蛋白A2(cycfinA2，CCNA2)、细胞周期蛋白E2(cyc~nE2，CCNE2)和核转录因子E2F-2基因的表达；肝癌组织表达谱芯片数据分析结果显示，它们的表达与SOX9存在一定的相关性。结论：SOX9在肝癌组织中高表达，可以调节肝癌细胞的增殖和衰老，且其分子机制可能通过影响细胞周期蛋白及核转录因子E2F-2等增殖调控基因的表达而实现。[关键词1肝肿瘤；性别决定区Y蛋白质；细胞增殖；RNA，小分子干扰[中图分类号】R73

5、5．7[文献标志码】A【文章编号】i000—7431(2014)05—0404—09Proliferationofhe~tocellularcarcinomacellsisinhibitedbyRNAinterferenceonSOX9LUOQin。，YANGXin-rong，WANGNing’，GUDi—shui。，HUFang—yuan。，FANJia，QINWen—xin。1．StateKeyLaboratoryofOncogenesandRelatedGenes，ShanghaiCancerlnstJtute，Ren

6、jiHospital，ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200032，China；2．KeyLaboratoryforCarcIn0genesis＆CancerInvasion(MinistryofEducation)，LiverCancerInstitute，ZhongshanHospital，ShanghaiMedicalCollege，FudanUniversity，Shanghai200032，China【ABSTRACT】0bjective：Toa

7、nalyzetheexpressionIevelofsex-determiningregionYboxprotein9(SOX9)inhepatocelluIarcarcinoma(HCC)tissues，investigatetheeffectofSOX9ontheproliferationofHCCcells，andexploreitspossiblemolecularmechanism．Methods：SOX9expressionlevelswereanalyzedinnormalliver．Iivercirrhosi

8、s．andhumanHCCtissuesampiesusingthepublicclinicaldatasets．ThenItsmRNAexpressionIevelsin32pairedsamplesofHCCtissueanditscorrespondingpara—cancerous