慢性丙型肝炎患者丙肝病毒感染与载脂蛋白B关系的初步研究-论文.pdf

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1、憾饵琢字杂志，2013，23(4)：45～47◎2013CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATIONdoi：10．3969／j．issn．1005—1740．2013．04．015慢性丙型肝炎患者丙肝病毒感染与载脂蛋白B关系的初步研究*杨桂汪付兵#[中图分类号]R512．62[文献标识码]A[文章编号]1005—1740(2013)04—0045—03炎防治指南》[4]。6O例在本院体检健康者为对照团组，其中男29例，女31例，年龄(60．50±4．90)岁。研究对象均为随机选择的汉族人，无血缘关系

2、。经统计学分析，CHC组与对照组性别、年龄均无显著性差异(P>O．05)。所有受试者均知情同意。1．2试剂与仪器人全血基因组DNA抽提试剂盒购自Gentra公司；PCR扩增仪为ABI9600；HCV—RNA荧光定量PCR试剂盒购自深圳达安基因公司；LightCy-cler荧光定量PCR仪为Roche公司产品；上游引物P：5’一GCTGGGGTTTCTTGAAGACA一3’、下游引物P2：5’一CAAGCGTCTTCAGTGCTCTG一3’由上海赛百盛公司合成；AmpliTaqGoldPCRMasterMix(2×)购自

3、LifeTechnologies公司；生化分析仪采用Olympus3200型；LDL和ApoB检测试剂由日本积水医疗株式会社提供。1．3标本采集研究对象空腹12h后于次日清晨用真空采血系1资料与方法统采集外周静脉血4ml，平分入无抗凝试管和ED—1．1研究对象TA—K抗凝试管，分别用于血清LDL水平、ApoB本院门诊或住院的78例CHC患者作为CHC水平、HCV—RNA载量检测和ApoB启动子区一组，其中男36例，女42例，年龄(61．70±5．30)岁，516C／T基因多态性分析。分离血清和抽提外周血排除合并肾功能损

4、伤和其它慢性肝脏疾病(甲型、乙DNA后，保存于一8O℃冰箱。入选的CHC患者采型、戊型病毒性肝炎，药物性肝炎，酒精性肝炎，自血前均未进行临床治疗。身免疫性肝炎)以及可引起脂代谢紊乱以及其它疾1．4基因多态性检测病(包括糖尿病、甲状腺功能亢进)者。诊断标准参1．4．1PCR扩增：反应体系25t~1，AmpliTaqGold照2004年中华医学会肝脏病学分会公布的《丙型肝360MasterMix(2×)1Ol，弓I物Pl／P2各0．5l，DNA模板1g，加灭菌去离子水使总反应体积为25肚l。反应条件：95℃预变性5min；

5、95℃30s、55℃*[基金项目]国家病毒重点实验室开放基金(2011009)45s、72℃45s，35个循环；最后72℃延伸7min。扩[作者单位]武汉大学中南医院，武汉430071；通讯作者，Email：wfb20042002@sina．com增产物经2琼脂糖凝胶(含0．5g／L溴乙锭)电本文2013—08—17收到，2013—09—17修回，2013—09—20接受泳，紫外灯下观察结果。1．4．2限制性片段长度多态性(RFLP)分析：取PCRm曩扭学杂志2013年第23卷第4期倚床研奔杨桂，汪付兵产物15,~1，

6、加EarI1U，10×缓冲液2l，加灭菌去离为TT基因型，见图1。子水至终体积20肚l，37℃孵育10h，酶切产物用2琼脂糖凝胶(含0．5g／L溴乙锭)电泳，紫外灯下观MarkerCC基因型CT基因型TT基因型察带型并确定基因型。1．5血清LDL和ApoB水平检测自一80℃冰箱取出事先分装好的批量冻存血清，室温解冻，平衡室温，用Olympus3200型全自动生化分析仪检测，方法为免疫比浊法，严格按照操作手册进行。1．6血清HCV—RNA定量检测自一8O℃冰箱取出事先分装好的批量冻存血清，冰上解冻。按照HCV—RNA荧光

7、定量PCR试图1ApoB启动子区一516位点基因型电泳结果剂盒说明书，采用Roche公司LightCycler荧光定量PCR仪检测血清HCV—RNA载量。依据病毒载2．3．2ApoB启动子区一516C／T基因型分布：CHC量检测结果将78例CHC患者分为低载量组(<1O组与对照组ApoB基因启动子区一516C／T多态性基copies／ml，n一57)和高载量组(≥10copies／mL，因型频率分布符合Hardy—Weinberg平衡检验。两一21)。组ApoB基因启动子区一516C／T多态性检测结果如1．7统计学处理

8、加752表1所示，CHC组CC基因型频率明显高于对照组∞∞印∞∞∞采用SPSS13．0统计学软件分析处理。计量资(P<0．05)，而TT基因型频率低于对照组(P<0．料用均数±标准差(±)表示，组间比较采用t检05)，两组间CT基因型频率差异无统计学意义(P验；基因型频率的差异用Y。检验；相关性检验用>0．05)。Pearson相