不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf

不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf

ID:54984733

大小:214.18 KB

页数:3页

时间:2020-05-07

不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf_第1页
不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf_第2页
不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf_第3页
资源描述:

《不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响-论文.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库

1、64·主堡塞坠I病毒学盘查14年2月_28卷第1期ChineseJExpClinVirol,February2014,Vo1.28,No.1技术方法.不同分离介质对小鼠原代肝星状细胞分离纯化效果的影响李红敏,任慧,郝晓花,黄玉波,魏红山【摘要】目的比较不同的分离介质对小鼠原代肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSCs)分离纯化效率的差异。方法肝门静脉原位灌注,预灌注不含钙镁离子的D—Hanks液及含有Ⅳ型胶原酶的灌注液,取消化后的肝脏,分别采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz

2、作为分层介质,密度梯度离心纯化原代HSCs。显微镜下观察细胞纯度并计算细胞得率。锥虫蓝染色判断细胞活率。激光共聚焦显微镜观察原代HSCs的固有荧光情况。油红O染色观察获得原代HSCs的纯度情况。结果采用Ficoll—PaquePLUS、Percoll、Nycodenz分离细胞得率分别为(1±0.5)×10。,(1±0.5)×10,(0.8±0.5)×10;纯度分别为75%~85%,91%~95%,91%一95%;活率均高于90%。结论用Nycodenz作为分离介质分离肝星状细胞的方案最优。【主题词】肝硬化;细胞,培养的;细胞/分

3、离和提纯;小鼠TheperformanceofdiferentisolationregentsforpurificationofmiceprimaryhepaticstellatecellsLiHongmin,RenHui,HaoXiaohua,HuangYubo,WeiHongshan.BeijingDitanHospital,CapitalMedicalUniversity,Beng100015,ChinaCorrespondingauthor:WeiHongshan,Email:drwei@ccmu.edu.cn【Abst

4、ract】0bjectiveTocomparetheadvantagesanddisadvantagesofthethreeisolationregentsforisolatingprimaryhepaticstellatecells(HSCs)ofmice.MethodsThemiceHSCswasisolatedbyinsituperfusionofper—perfusionsolution,perfusionwithcollagenaseIV.Afterdigestion,Ficoll—PaquePLUS,percolla

5、ndNycodenzwereuseforthegradientcentrifugation.Tocalculatethequantity,purityandtheviabilityoftheHSCs.TheautofluorescenceandOilOstainingwereusedtoidentifyprimaryHSCs.ResultsThequantityofHSCswas(1.0±0.5)×10。,(1.0±0.5)×10,(0.8±0.5)×10。/g—liver,respectively.UsingFicoll—Pa

6、quePLUS,percollandNycodenz,thepurityofprimaryHSCswere75%一85%,91%·95%,91%一95%,respectively.Theviabilitywereallabove90%.ConclusioncomparedwithFicoll—PaquePLUSandpercoll,theNycodenzisthethebestseparatingmediumforisolationandpurificationofmiceprimaryHSCs.【Keywords】Liverc

7、irrhosis;Cells,cultured;Cells/isolationandpurification;Mice肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC),是肝内种不同介质分离小鼠HSCs的性能进行了比较分的一种非实质细胞,占肝细胞的5%~8%,分布于析,结果显示,与其他分离介质相比,Nycodenz具有肝脏的Disse隙内,是合成、分泌细胞外基质的主要较好的分离纯化性能。来源。HSCs活化产生的细胞因子导致肝脏细胞外1材料与方法基质降解和胶原纤维增加是肝纤维化发生、发展的主要原因。因此,原代HSCs的分

8、离、培养也就成为1.1材料Ficol1.PaquePLUS、Percol1分离介质肝纤维化发病机制研究的关键。但与大鼠HSCs相(GEHeahhcare公司),以及Nycodenz(Axis—shield公比,小鼠原代HSCs分离纯化更为困难。我们对几司)按照制

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。