CDC25A在肝细胞癌中的表达及意义-论文.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第25期CDC25A在肝细胞癌中的表达及意义王红雷(南阳市第二人民医院，河南南阳100853)摘要：目的观察细胞周期蛋白CDC25A在肝细胞癌组织中的表达，并探讨其与患者预后的关系。方法应用免疫组化法检测50例肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中CDC25A的表达，Westernblot法检测30例肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中CDC25A的表达，分析CDC25A表达与病理特征及临床预后的关系。结果CDC25A在肝癌组织中高表达，在癌旁及正常肝组织中低表达，CDC25A与肿瘤分化

2、程度、肿瘤大小有关，与AFP水平及有无肝炎无关；其阳性表达的患者生存期较短。结论CDC25A表达与病理分化程度、肿瘤大小及患者生存期相关。关键词：肝肿瘤；CDC25A；生存期doi：10．3969／j．issn．1002466X．2014．25．019中图分类号：R735．7文献标志码：B文章编号：1002—266X(2014)25—0045-02CDC25A为一种双特异性酪氨酸激酶(dsPTP)，加sP液，并37℃恒温箱中进行孵育20rain。PBS它在真核生物细胞中通过促进诱导细胞进入有丝分

3、缓冲液冲洗3次；DAB染色、苏木素液复染、脱水、裂期，在多种癌组织中表达¨J。CDC25A过表达可封片、光镜观察。以增强细胞的增殖活性，从而引起肿瘤的发生。1．2．2新鲜标本CDC25A表达检测采用Western目前证据表明，在女乳腺癌中CDC25AmRNA高表blot法。取冻存组织标本100mg于2mLEP管中，达者远期生存率明显降低J，但未有CDC25A与肝剪碎组织块后加400L裂解液(含PMSF)匀浆，裂细胞癌患者的生存时间相关的报告。近年来我们观解充分后将裂解液移至1．5mLEP管内，4

4、℃下察了CDC25A在肝细胞癌中的表达情况，并探讨其12000r／rain离心5min，提取上清分装于0．5mL表达与临床病理特征及生存时问的关系。EP管内，一2OcC保存；Bradtbrd法蛋白定量；配制1资料与方法5％浓缩胶和10％分离胶，沸水中蛋白变性10rain，1．1临床资料选择2008年1月～2013年6月本加样、恒压120V电泳后80V恒压转膜；转膜后用院病理科存档的肝细胞癌及癌旁组织标本5O份，患5％的脱脂奶粉室温封闭；加入一抗后4℃过夜；者男39例、女11例，年龄(51．62±

5、7．87)岁，术后病TBST液清洗3次后加1：2000稀释的二抗，室温孵理诊断均为肝细胞癌。肝癌新鲜标本3O份，患者男育2h后TBST清洗3次；ECL后移至暗室曝光、显24例、女6例，年龄(52．34±9．37)岁，均取自本院影清洗、定影。2010年1月～2013年6月手术切除的肝癌患者。1．2．3结果判定免疫组化：采用Greenspan半定正常肝组织标本17份，患者男13例、女4例，年龄量法对细胞染色强度及阳性细胞百分率进行评分，(43．55±11．46)岁，取自2010年1月～2013年6细

6、胞基本不着色为1分，总等着色为2分，强着色为月本院手术切除的肝血管瘤患者。3分。着色细胞占计数细胞百分比率为0者，记01．2方法分，<10％为1分，10％～50％为2分，>50％为31．2．1组织标本CDC25A表达检测采用免疫组分，将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得化染色法。标本固定、包埋、切片后65℃烤30min，分各自相乘，即得阳性系数。阳性系数为0分者为依次脱蜡水化，双蒸水冲洗3次后用3％的双氧水阴性(一)，1～3分为弱阳性(+)，94分者为阳性浸泡15rain，0．01mol／L

7、的PBS缓冲液冲洗3次后(++)；Westernblot：以内参及检测指标得出相对将切片浸入枸橼酸盐缓冲液中，水浴煮沸15rain后集中的条带为阳性。冷却，PBS缓冲液冲洗3次后滴加1：10浓度的山羊1．2．4统计学方法采用SPSS17．0统计软件，计血清室温下孵育20rain，切片滴加一抗后4℃冰箱量资料以±s表示，组间比较采用t检验；计数资料中过夜；PBS缓冲液冲洗3次后滴an-抗并37℃的以百分比表示，组间比较采用检验或Fisher确切恒温孵育箱中孵育20rain，PBS缓冲液冲3次后滴概

8、率法。生存分析采用Kaplan—Meier法Log—rank检45山东医药2014年第54卷第25期验。P≤0．05为差异有统计学意义。进行；CDC25A在多种癌组织中表达，包括乳腺2结果癌、肺癌、胃癌、肝岁一∞癌∞一．、岁∞一胰别性腺男癌女、甲度程一分状化分一化一腺分化分～癌～等0∞一，目0一前炎肝有有研无径一长肿2．1免疫组化检测CDC25A表达结果肝细胞癌究通过Westernblot检测法表明CDC25A在肝细胞组织、癌旁组织、正常肝组织均检测到有CDC25A表癌组织中高表达J。本文联合免