总酚含量测定.doc

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1、一、 测定方法概述 1.依据酚类物质可以被高锰酸钾氧化的性质，高锰酸钾滴定法 2.酚类化合物在碱性条件下可以与4-氨基安替比林反应生成红色染料，比色 3.酚羟基可与酒石酸铁中的铁离子反应生成蓝色络合物比色 4.酚类物质还原福林试剂生成蓝紫色物质，比色 二、高锰酸钾滴定法测多酚 此方法多应用在茶叶上 原理：酚类物质可以被高锰酸钾氧化，烟叶中还有一些酚类衍生物和非酚类物质也可以被高锰酸钾氧化，会使测定结果偏高。因此滴定须分两步进行：第一步滴定待测液中总还原性物质，第二步用明胶盐溶液将酚类物质沉淀后，测定待测液中其它还原性物质含量，二者之差就是样品中多酚含量。但是绿原酸不能被

2、沉淀，因此，此法不易用来测定烟草多酚。0.1%靛红作指示剂。 酚类提取：采用沸水浴方法提取。 三、氨基安替比林比色法 此方法用来测样品中挥发性酚类化合物，常常应用在食品，水等挥发酚的测定。灵敏度最高高。 原理：酚类化合物在碱性溶液中，当有氧化剂铁氰化钾存在时，可以与4-氨基安替比林生成一种红色染料，用分液漏斗将红色染料萃取到氯仿层，在460nm处比色。用苯酚作标准曲线，计算出样品中挥发性酚类物质含量。 1此方法酚的提取步骤比较麻烦： 先在2.5mol/L硫酸溶液中加热回流1小时，将样品中中挥发酚提取出来。通入水蒸气把酚蒸馏出来，收集并定容。 2苯酚腐蚀性强，为结晶体，不

3、好秤取。 3蒸馏装置不能漏气，且所用的橡皮类物质需要事前用碱水浸泡，并水煮10min。 四、酒石酸比色法 原理：酚类物质的羟基与酒石酸铁中的铁离子生成蓝色络合物，根据络合物溶液颜色深浅，在540nm处比色，可测出烟叶中酚类物质含量。以儿茶酚或没食子酸乙酯作标准溶液。可以用来测定烟草中的多酚。 此方法酚的提取与福林法测多酚提取步骤一样。 五、福林法测烟叶多酚/总酚 1.原理; 在碱性条件下利用多酚的还原性，多酚可以将磷钨钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量城正相关，可以用分光广度计进行测定。 2.试剂和仪器： 试剂：儿茶酚或没食子酸乙酯，钼酸钠，磷钨酸，Na2CO3 仪器：

4、水浴锅，721分光光度计，试管，三角瓶，漏斗，滤纸，移液管。 3. 操作步骤： 3.1待测液制备：50mg烟样于150mL三角瓶中，加入80℃蒸馏水50mL，80℃以上温度水浴提取30min（期间需要摇晃几次），取出冷却，过虑并定容至100mL容量瓶中。此为待测液。  3.2  测定：2支干试管，各加入5ml待测液，一支加福林试剂5ml，一支加5ml代替福林试剂，摇匀3分钟后，各加入5ml10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，以不加福林试剂的试管管为对照，700nm比色。 3.3 绘制标准曲线： 儿茶酚母液：1mg/ml，再依次配制成100ml中含有儿茶酚0.5，1

5、.0，1.5，2.0mg的4种不同浓度的标液。 取5支试管，分别加入上述标液5ml，对照加蒸馏水5ml，然后各加福林试剂5ml，摇匀3分钟后，各加入5ml 10％Na2CO3,振荡，室温下显色1h，700nm比色。 7总酚含量测定  参考韩富根的方法，略有改动， 7.1样品处理：取鲜叶0.5g，加3ml 95%乙醇研磨成匀浆状， 再加5ml 95%乙醇过滤，用95%乙醇定容至25ml。以儿茶酚作标准曲线。 7.2样品测定：取2 ml待测液于10ml离心管中，再加入2 ml福林试剂，摇匀，3min后加入10%碳酸钠2 ml振荡。静置1 h后700 nm处比色测定，以2ml

6、蒸馏水代替待测液作为空白。根据标准曲线计算总酚含量。【七种与小麦近缘的野生植物对禾谷缢管蚜抗性的生化机制】 7.3试剂配制 ①福林试剂：将钨酸钠25g、磷钼酸5g，磷酸12．5ml同蒸馏水188ml一道回流煮沸2h，冷却后用蒸馏水定容至1L。 ②10%碳酸钠溶液：用无水碳酸钠配制，冬季气温低时会析出碳酸钠结晶，可在温水浴上加热溶解后使用。 ③酚标准溶液：先配制成100ml含儿茶酚60mg的溶液，再依次配制成100ml中含儿茶酚不同浓度0.5 1.0 1.5 2.0mg (临用时再配)。10mg/100ml为母液 标准系列的配置 总体积ml666666福林试剂ml2222

7、2210%Na2CO3ml 222222邻苯二酚ml00.10.20.30.40.5蒸馏水ml 21.91.81.71.61.5浓度ug/ ml01020304050