蓝白斑筛选步骤.doc

《蓝白斑筛选步骤.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、1.取目的基因DNA10ul，加入到100ul的感受态细胞中，轻轻混匀，并置于冰上放置30min。2.将感受态细胞于42℃水浴中热休克90s后迅速置于冰上放置2min。3.加入800ulLB液体培养基（-AMP），37℃，200r/min摇菌液60min。4.将摇菌后的转化菌液3000rpm离心3min，吸取LB液体上清液700ul弃除，留200ul液体在离心管内，轻轻吹打沉淀，然后取每组连接反应转化原液取200μl+40ulX-gal溶液+4ulIPTG溶液混匀，用无菌玻棒均匀涂布于筛选培养基上,37℃

2、下培养半小时以上,直至液体被完全吸收。5.倒置平板于37℃继续培养12-16小时,待出现明显而又未相互重叠的单菌落时拿出平板。放于4℃数小时,使显色完全。6.用无菌枪头挑取白色单菌落接种于含Amp50μg/ml的5mlLB液体培养基中,37℃下振荡培养12小时。