喜树碱和10-羟基喜树碱提取方法的比较与优化.doc

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1、喜树碱和10-羟基喜树碱提取方法的比较与优化　　摘要：以乙醇为溶剂，比较了浸提法、超声波法、微波法和匀浆提取法从喜树幼叶中提取喜树碱和１０－羟基喜树碱的效果，并通过正交试验设计对提取温度、提取时间以及匀浆时间对提取效率的影响进行了分析。利用反向－高效液相荧光法检测喜树碱和１０－羟基喜树碱的浓度。结果显示提取１０－羟基喜树碱的最优条件为匀浆１２ｍｉｎ、６０℃浸提３０ｍｉｎ、超声处理３０ｍｉｎ；提取喜树碱的最优方案为匀浆１２ｍｉｎ、６０℃浸提３０ｍｉｎ、超声处理１５ｍｉｎ。多种提取工艺混合使用能显著提高喜树碱和１０－羟基喜树碱的产率。　　关键词：喜树碱；１０－羟基喜树碱；喜树

2、；提取方法　　中图分类号：Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4459-04　　　　ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＣａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎａｎｄ　　１０－HｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｆｒｏｍＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ　　　　ＳＨＥＮＳｈａｏ－ｈｕａ，ＬＩＵＪｉ－ｙａｎ，ＨＵＪｉａｎｇ－ｑｉｎ，ＣＨＥＮＢｏ，ＷＡＮＧＬｉ－ｌｉｎ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇｅｔｈａｎｏｌａｓｓｏｌｖｅｎｔ，４ｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｔｉｒｒｉｎｇｅｘｔｒａｃｔ

3、ｉｏｎ，ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗereａｄｏｐｔｅｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎａｎｄ１０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎｆｒｏｍＣａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｈｏｍｏｇｅｎａｔｅｔｉｍｅｏｎｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆＣＰＴａｎｄＨＣＰＴｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｄｅｓｉｇｎ．Ａｎｄｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｓ

4、ｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙreverse-highperformanceliquidfluorescencemethod．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇＨＣＰＴｗｅｒｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎｆｏｒ１２ｍｉｎ，６０℃ｗａｔｅｒｂａｔｈｆｏｒ３０ｍｉｎａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｒ３０ｍｉｎ；ｗｈｉｌｅｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇＣＰＴｗｅｒｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎｆｏｒ１２ｍｉｎ，６０℃ｗａｔｅｒｂａｔｈｆｏｒ３０ｍｉｎａｎｄｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｏｒ１５ｍｉｎ.Ｔｈｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏ

5、ｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｃｏｕｌｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；１０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ；Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａａｃｕｍｉｎａｔａ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ　　　　喜树为山茱萸目珙桐科旱莲属植物，是中国特有的多年生高大落叶乔木。喜树碱最早从喜树中分离，具有独特的抗癌功效，１０－羟基喜树碱是喜树碱的衍生物，与喜树碱相比，其毒副作用更小［１］。研究表明，喜树碱及其衍生物对多种癌症均有一定疗效［２－５］，而结合其他药物能显著提高其抗癌功效［６

6、－９］。喜树碱和１０－羟基喜树碱广泛分布于喜树各组织器官，关于喜树碱和１０－羟基喜树碱提取方法的报道很多，有研究表明以体积分数５５％左右的乙醇溶液为溶剂，提取喜树碱和１０－羟基喜树碱效果最佳［１０－１３］。考虑到试验的安全性以及成本因素，本试验以５５％的乙醇为提取剂，以三年生喜树的幼叶为材料，采用浸提法、超声波提取法、匀浆法，并首次利用微波处理提取喜树中喜树碱和１０－羟基喜树碱，应用反向高效液相荧光检测法检测其提取效果，以期找到同时提取喜树碱和１０－羟基喜树碱的最佳方法。　　１材料与方法　　１．１试验材料　　以温室内生长的三年生喜树幼苗的叶片为供试材料，６０℃烘干至恒重，

7、研磨成粉末，避光保存备用。喜树碱和１０－羟基喜树碱标准品购自美国Ｓｉｇｍａ公司。　　试剂：乙腈为ＨＰＬＣ级，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。仪器：ＫＱ５２００ＤＥ型超声波清洗仪，ＰＴ１３００Ｄ匀浆仪；美国Ｗａｔｅｒｓ公司高效液相色谱仪Ｗａｔｅｒｓ６００高压泵、Ｗａｔｅｒｓ２４７５荧光检测器、Ｗａｔｅｒｓ７１７ｐｌｕｓ自动进样器、ＷａｔｅｒｓＥｍｐｏｗｅｒ色谱工作站，浙江大学分析测试中心。　　１．２方法　　１．２．１喜树碱和１０－羟基喜树碱的提取①浸提法：称取１．００ｇ喜树嫩叶粉末，溶于２０ｍＬ５５％的乙醇溶液中，在不同的温度下