喜树碱及其衍生物的提取和应用.ppt

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1、喜树碱的提取及其衍生物的应用Extractionofcamptothecineanditsderivatives,andapplications蒲彩蓉20090411310019杨庆先20090411310028目录概述理化性质喜树碱的提取方法喜树碱类抗癌药的作用原理几种重要的喜树碱类抗癌物质概述喜树（Camptotheca）为山茱萸目珙桐科乔木植物，是我国特有的一种高大落叶乔木，广泛分布于长江流域及西南各省。喜树中主要含喜树碱（camptothecine）、喜树次碱（venoterpine）、10-羟基喜树碱（10-

2、hydroxycamptothecine）、10-甲氧基喜树碱（10-methoxycamptothecine）、白桦脂酸（betulicacid）、长春甙内酰胺（vincoside-lactam）等。1966年美国的MonroeE.wall博士从喜树茎的提取物中分离得到了抗癌活性物质，将其命名为喜树碱（Camptothecine）。喜树碱属于生物碱类。理化性质喜树碱的分子式C20H16N2O4，化学名称为：1H一吡喃酮[3，4：6，7]吲哚并[1，2一b]喹啉一3，14(4H，2H)一二酮喜树碱是淡黄色结晶，一个含喹

3、啉、内酯、内酰胺的五环平面化合物，此五环中仅有一个不对称中心(C20)，其构型为S型。m.p.264～266℃，[α]D40°，不溶于水，可溶于氯仿、乙醇、乙酸、乙酸乙酯等。没有明显的碱性，属于中性乃至近酸性物质，与一般生物碱试剂无反应，也不能与酸成盐。喜树碱的提取方法95％乙醇索氏回流法0.3%NaOH溶液提取法95％乙醇超声提取法匀浆提取法常温冷浸提取法水浴振荡提取法95％乙醇索氏回流法工艺流程干燥喜树果实粉碎至10~20目注入虹吸量1.6~1.7倍的95%乙醇将样品装入滤纸斗并将开口处封死80℃水浴提取2~4小时

4、取上清液用盐酸调PH为2~3过滤的沉淀用甲醇洗涤2~3次得喜树碱粗品0.3%NaOH溶液提取法工艺流程干燥喜树果实粉碎至10~20目0.3%氢氧化钠液渗漉收集6~8倍液1.5%NaOH浸渍12h装入渗漉桶中搅拌吸附6h用板框过滤机过滤按喜树果实粗粉量0.6%加入活性炭加盐酸搅拌调pH为2~3将吸附的活性炭干燥后用氯仿回流洗脱喜树碱将洗脱液回收氯仿至干膏体加甲醇煮沸溶解膏体冷却至室温喜树碱析出后过滤用甲醇洗涤2~3次干燥得喜树碱粗品95％乙醇超声提取法工艺流程干燥喜树果实粉碎至10~20目将提取液过滤得滤液95%乙醇超声

5、提取2次得提取液将滤液浓缩得浓缩液将浓缩液离心得上清液加盐酸搅拌调pH为2~3过滤得沉淀用甲醇洗涤2~3次得喜树碱粗品三种提取法比较准备阶段准确称取喜树碱标准品5．00mg，以无水乙醇为溶剂，超声波助溶并定容至100mL；准确吸取1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL、6．0mL、7．0mL、8．0mL、9．0mL、10．0mL标准液，分别置于10mL容量瓶中，用无水乙醇稀释定容至刻度，摇匀。该标准系列浓度为：5．0、10．0、15．0、20．0、25．0、30．0、35．0、40．0、45．0、5

6、0．0mg/L。按照1．3色谱条件进行测定，每个浓度标准液重复进样5次，取色谱峰面积的平均值。根据峰面积(Y)与标准液浓度(X)呈正比的关系确定线性回归方程为：Y=32114X一16995，相关系数R2=0．9985。色谱曲线对照实验精确称取干燥喜树叶粉42份，每份1．00g，按表l所示的3种提取方法，即索氏回流提取、超声提取和碱法提取，辅以不同的去除杂质的试验方案分别提取喜树碱，高效液相色谱(HPLC)法测定喜树碱含量，每个方案重复3次，每次进样5针，取平均值，筛选出既能有效去除杂质又不影响喜树碱提取率的方案作为本试

7、验的最佳提取方案。结果见表1。比较与分析通过对14种提取方案(见表1)提取液中的喜树碱含量进行方差分析和Duncan多重比较，结果显示：采用95％乙醇索氏回流法提取的方案l、方案2、方案3和方案4，经HPLC法测定喜树碱含量极显著地高于采用95％乙醇超声提取和0．3％NaOH溶液提取的各方案。比较采用索氏回流提取的方案1—4可以看出：方案1、方案3中喜树碱含量极显著地高于方案4，方案2与方案1和方案3差异不显著，与方案4在0．05水平差异显著，但在0．01水平差异不显著。即样品未经任何处理的提取方案，与经过温水浸泡或经

8、过石油醚萃取处理的提取方案相比。喜树碱含量差异不显著，但与同时经过温水浸泡和石油醚萃取处理的提取方案相比差异极显著。表明在95％乙醇索氏回流提取过程中采取的去除杂质的方法均不会显著影响样品中喜树碱含量。但若同时采用两种去除杂质的方法则会极显著的降低提取液中的喜树碱含量。结论索氏回流法操作简便，溶剂消耗量小，对有效成分的提取也比较完