黄鳝载脂蛋白apoAI基因的克隆及序列分析.doc

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1、黄鳝载脂蛋白apoAI基因的克隆及序列分析　　摘要：以黄鳝肝脏为研究材料，提取总ＲＮＡ，利用同源克隆技术获得了黄鳝的载脂蛋白ａｐｏＡＩ基因的部分编码区和３′ＵＴＲ，其ｃＤＮＡ序列长度为１１４５ｂｐ，其中编码区长度为７７２ｂｐ，编码２５６个氨基酸。序列同源性分析表明，黄鳝的ａｐｏＡＩ基因的氨基酸序列与其他鱼类的ａｐｏＡＩ基因的氨基酸序列具有非常高的同源性，是载脂蛋白家族的一个新成员。黄鳝ａｐｏＡＩ基因的克隆为进一步深入研究该基因的功能积累了基础资料，在黄鳝育种及医药研制方面具有潜在的应用价值。　　关键词：黄鳝；载脂蛋白；ａｐｏＡＩ；克隆；序列分析　　中图分类号：Ｑ７８５；Ｑ９５９．４８２

2、文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4500-03　　　　ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎａｌｙｓｉｓｏｆAｎａｐｏＡＩＧｅｎｅｉｎＲｉｃｅＦｉｅｌｄＥｅｌ　　Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ　　　　ＱＩＵＱｉｎｇ－ｃｈｏｎｇ，ＧＥＮＧＸｉａｏ－ｘｕｅ，ＬＩＵＣｈｅｎｇ－ｄｕ，ＳＵＮＷｅｎ－ｘｉｕ　　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐａｒｔｏｆｃｏｄｉｎｇａｎｄ３′ＵＴＲｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆａｐｏＡＩｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅｔｏｔａｌｌｉｖｅｒＲＮＡｏｆｒｉｃｅｆｉｅｌｄｅｅｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｌ

3、ｅｎｇｔｈｏｆｔｈｉｓｃＤＮＡｓｅｑｕｅｎｃｅｓwaｓ１１４５ｂｐ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ７７２ｂｐｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎａｎｄｅｎｃｏｄｅｄ２５６ａｍｉｎｏａｃｉｄｓ．ＨｏｍｏｌｏｇｙａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗａｓｈｉｇｈｓｅｑｕｅｎｃｅｓｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓａｎｄotherｆｉｓｈｅｓ’ａｐｏＡＩｇｅｎｅｓ，ｗｈｉｃｈwereｂｅｌｏｎｇｔｏｔｈｅａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｆａｍｉｌｙ．ＣｌｏｎｉｎｇｏｆｔｈｅＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ’ａｐｏＡＩｇｅｎｅｇａｖｅｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｉｎｖｅ

4、ｒｓｔｉｇａｔｉｏｎｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄｈａdｔｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎＭｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ’ｂｒｅｅｄｉｎｇａｎｄｍｅｄｉｃａｌｕｓａｇｅ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍｏｎｏｐｔｅｒｕｓａｌｂｕｓ；ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ；ａｐｏＡＩ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ　　　　黄鳝广泛分布于亚洲东南部，是一种普遍的淡水食用鱼，具有很高的营养价值和经济价值，现已成为长江流域主要省分水产养殖业的主导产业之一［１］。黄鳝的饲料代谢对黄鳝的科学养殖具有重要意义，一直是生产实践和科研工作的难点和热点之一［２－４］。许多学者研究了饲料中的

5、蛋白质和脂肪含量对黄鳝生长的影响，但由于受黄鳝规格、饲料中的脂肪来源以及实验水温等因素的影响，其结果存在较大差异［２，４，５］。有研究［６］指出，饲料中的能量和蛋白质含量与动物机体的脂类代谢密切相关。因此，寻找与脂类代谢相关的生理指标对于确立饲料中蛋白质和脂肪对黄鳝生长的影响具有重要的意义。载脂蛋白是携带脂肪的主要载体，是构成血浆脂蛋白的蛋白质组分，其基本功能是运载脂类物质及稳定脂蛋白的结构，某些载脂蛋白还具有激活脂蛋白代谢酶、识别受体等功能［７］。在各种载脂蛋白中，载脂蛋白ＡＩ是一种主要的载脂蛋白，其可能是参与脂蛋白代谢和维持正常血清脂类代谢平衡的核心载脂蛋白［８］。目前，与黄鳝脂类

6、代谢相关的载脂蛋白基因及其功能的研究鲜见报道。本研究以黄鳝肝脏为研究材料，通过同源克隆获得了其载脂蛋白ａｐｏＡＩ基因的序列，并对其ｃＤＮＡ序列进行了分析，以期为深入研究黄鳝载脂蛋白ａｐｏＡＩ基因的功能提供基础资料。　　１材料与方法　　１．１实验材料　　实验用黄鳝购自荆州市西门菜市场，质量约１００ｇ，解剖后取其肝脏并迅速放入液氮中冷冻，然后转入－８０℃超低温冰箱中保存备用。提取ＲＮＡ所用的Ｔｒｉｚｏｌ和ＡＭＶＲｅｒｖｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓ购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司；ｐＭＤ１８－Ｔ载体、ｒＴａｑＤＮＡ聚合酶、ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００等购自ＴａＫａＲａ公司；ＤＮＡ凝胶回收试剂盒

7、购自Ｏｍｅｇａ公司；Ｘ－ｇａｌ、ＩＰＴＧ、琼脂糖、酵母提取物、胰蛋白胨等购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＤＨ５α为长江大学生命科学学院分子生物学实验室保存；其余生化试剂均为国产分析纯。　　１．２方法　　１．２．１引物设计及合成参照已报道的其他鱼类的ａｐｏＡＩ基因设计了１对简并引物用来扩增黄鳝的ａｐｏＡＩ基因，引物序列为ＡＰＯ１５′－ＣＣＴＣＴＫＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＧＣＴＴＴＣ－３′和ＡＰＯ２５′－ＴＧＣＣＧＡＡＴＣＴＴＴＴ