幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析

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1、【论著】幽门螺杆菌flaB基因克隆及序列分析夏晓燕1,段广才2、'，代丽萍J范清堂'［摘要1目的：将幽门螺杆菌(Helicobacter、哄H,Hp)粮毛蛋白B亚单位基因(/ZoB)克隆到质粒载体PNEB193上，并进行序列分析，为Hp疫苗的构建奠定基础。方法：用PCR方法扩增Hp/ZaB基因，并将其定向克隆入质粒pNEB193±,然后进行序列分析。结果：PCR扩增获得长度为1545bp的肿基因片段，并成功克隆入pNEB193,序列分析结果显示扩增的JTaB基因序列与Genebank公布的JlaB基因序列基本一致。结论：本研究获得了flaB阳性克隆子，为Hp重组疫苗的

2、研究莫定了基础。［关键词］幽门螺杆菌；flaB;基因克隆；测序［中图分类号］R183［文献标识码］A［文章编号］1003-8507(2005)12-1592-03CLONEANDSEQUENCEANAI.YSISOFHELICOBACTERPYIjORIFLAGELLARPROTEINBGENE.XIAXiao-yan,DU-ANGuan-cai,FANQing-tang,etal.DepartmentofPublicHealthfHenanUniversityofSlierixafidTechnology,Luoyangf471009Abstract；Objecti

3、ve：TocloneHelicobacterpylori(H.pylori)flaRintoplasmidandanalyzegenesequence,andtolayfoundationforHpvaccine.Methods：H.pyloriflaBgenewasamplifiedbyPCRandwasinsertedintoplasmidpNEB193directionally.ThesequenceofflaBwasanalyzed.Results：A1545basepairslongflaBgenewasobtainedusingPCRmethodandw

4、asclonedintoplasmidpNEB193successfully.ThesequenceanalysisforflaBshowedthattheflaBgenewasidenticalwithGenebank's.Conclusion:ItisindicatedthatwehaveobtainedthecorrectflaBgenewhichwilllayfoundationforH・pylorirecombinantvaccine・Keywords：Helicobacterpylori;flaB;geneclone;sequence幽门螺杆菌（Hdic

5、obacterpylori.简称Hp）感染在世界范围内广泛流行。已证实Hp感染是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因，与胃癌和胃MALT淋巴瘤的发病也有密切关系⑴2】。目前，主要应用抗生素和质子泵抑制剂来治疗Hp,但广泛应用抗生素会导致耐药菌的不断增多⑶，复发的机会也较大。因此，根除Hp感染只有依靠疫苗的成功研制。鞭毛蛋白（FlaB）是Hp的蛋白质和免疫原之一，具有免疫原性且位于细菌表面，相对保守，有望成为Hp亚单位疫苗的重要候选组分之一⑷。本研究对Hp/ZoB基因进行了成功克隆。1材料与方法1.1质粒与菌株质粒PNEB193购自NEB公司。Hp菌株MEL-Hp27系本实验

6、室分离培养。大肠杆菌TB1系本研究室保存。1.2试剂试剂Sall、PsiI、PyrobestDNA聚合蘭、［资助项目］本课题系河南竹医学科技创新人才工程基金资助项目2000-84［作者单位］1•河南科技大学预防医学教研室，祜阳，471003;2.郑州大学公共卫生学院流行病学教研室；3•河南省分子医学亜点学科开放实脸室（作者简介］夏晓燕（1975~）,女，讲师，主买工作方向：分子诡行病学。（通讯作者］段广才，E-mail：gcduan©public2.zz.ha.cnTqDNA连接爾购自大连宝信生物工程公司，DNA标准分子质量XDNA/E8RI+HindDImarke

7、r购自上海生工公司。其他常规试剂按《分子克隆实验指南》要求配制。1.3Hp培养与Hp基因组DNA的制备1.3.1Hp培养Hp用含8%羊血的布氏琼脂培养基,3兀厌氧环境培养。1.3.2Hp基因组DNA的制备DNA用常规酚、氯仿抽提法获得。1.4引物合成根据NCTC11637flaB序列设计引物。在上游引物，引物由上海生工公司合成。5'端加PstI酶切位点，保留起始密码子ATG;在下游引物5'端加EooRlK切位点，保留终止密码子TAA。引物序列如下：UpperGGGCTGCAGATGAGTTTTAGGATAAA（26bp）PstIlower（XGAAT