肺癌细胞促进单核吞噬细胞MAPK相关通路活化诱导炎性细胞因子表达上调的研究.pdf

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1、·3282·检验医学与临床2014年12月第11卷第23期LabMedClin，December2014，Vo1．12，No．23·论著·肺癌细胞促进单核吞噬细胞MAPK相关通路活化诱导炎性细胞因子表达上调的研究娄鉴芳，史新惠，张淑平，柯星，曹艳，王鹏，黄蕾，黄珉琚，潘世扬，王芳(南京医科大学第一附属医院检验学部，南京210029)【摘要】目的通过建立人单核吞噬细胞系(THP一1)和人肺腺癌细胞系(SPCA1)共培养体系，检测共培养体系中THP—l的炎性细胞因子mRNA表达水平和丝裂原活化蛋白激酶通路(MAPK)的表达情况，初步阐明肺癌微环境对THP一1中炎性细胞因子表达的影响。方法体外

2、培养SPC—A1细胞系、THP一1细胞系，并建立二者共培养体系，设置THP一1单独培养组为对照组。24h后，收集各组THP一1细胞，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real—TimePCR)检测白细胞介素(II)一10、一6、一8及肿瘤坏死因子一a(TNF—d)的mRNA表达水平；Westernblot检测MAPK通路蛋白c—Jun氨基末端激酶及其磷酸化形式(JNK／p-JNK)、丝裂原活化蛋白激酶p38亚单位及其磷酸化形式(p38MAPK／p—p38MAPK)、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化形式(ERK／p—ERK)的表达。结果共培养24h后，共培养组THP一1的IL一1B、IL-8mRNA

3、表达水平均明显高于对照组(P<0．05)，分别为对照组的5．81、4．21倍；Westernblot结果显示共培养组p38MAPK、p-p38MAPK的表达水平均明显高于对照组(P<0．05)。结论肺癌细胞可引起肺癌环境中单核吞噬细胞中p38MAPK通路的活化，进而诱导II一10、II一8mRNA表达上调，有利于肿瘤炎症微环境的维持和促进肿瘤的进展。【关键词】人单核吞噬细胞系；共培养；人肺腺癌细胞系；细胞因子；MAPK通路DOI：10．3969／J．issn．1672-9455．2014．23．020文献标志码：A文章编号：16729455(2014)23-3282—03Studyonu

4、pregulationofexpressionofinflammatorycytokinesinducedbyMAPKsignalingrelatedpathwayofmononu。clearphagocytespromotedbylungcancercellsLOUJian—fang，SHIXin—hui，ZHANGShu—ping，KEXing，CAOYan，WANGPeng，HUANGLei，HUANGPei—jun，PANShi—yang，WANGFang(DepartmentofLaboratoryMedicine，theFirstAffiliatedHospitalofNan

5、jingMedicalUniversity，Nanjing210029，China)[Abstract]ObjectiveToestablishtheco—culturesystemofmononuclearphagocytesystem(THP一1)andhu—manlungadenocarcinomacellline(SPC—A1)。detecttheexpressionofmRNAofinflammatorycytokinesintheTHP1cell1ineandMAPKpathwaysintheco—culturesystem．andpreliminaryindicatethe

6、effectoflungcancermicroenvi—ronmentontheexpressionofinflammatorycytokinesinTHP一1cellline．MethodsTheSPC—A1andTHP一1celllineswereculturedinvitro，andtheco—culturesystemwasestablished．ThesingleculturedTHP一1celllinewassettedascontrolgroup．24hafterculturing。THP一1cellswerecollectedandreal—timePCRwasusedt

7、odetectinterleukin(II)1G，IL6andII8，andtheexpressionoftumornecrosisfactor(TNF)mRNA．ThewesternblotanalysiswasusedtodetecttheexpressionofJNK／p，JNK，p38MAPK／p，p38MAPK，ERK／pandERK．Results24hafterco—cultu—ring，theexpressionle