抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定.pdf

《抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国癌症杂志2O1O年第2O卷第4期CHINAONCOLOGY20l0Vo1．20No．424l抗CD3／抗CD19g~型双功能抗体的构建、表达及活性测定[摘要]背景与目的：微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式，它具有两个抗原结合位点，可选择性募集效应细胞到靶细胞周围，介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3／抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体，表达纯化后测定其生物学活性。方法：用重叠PCR(overlapPCR)和PCR方法，构建抗CD3／抗CD19diabody载体，转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His—tag亲和层析柱分离纯化

2、，12％SDS—PAGE电泳及Westernblot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果：基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3／抗CD19dlabodyl~够在原核表达系统中进行可溶性表达。12％SDS—PAGE显示28×10。和26Xi0。各有一条带，Westernblot在28×10显示有条带，与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg／L。FACS检测抗CD3／抗CD19diabody可与CD19Raji细胞~IJCD3Jurkat细胞特异结合，并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合

3、活性。结论：本实验成功构建了抗CD3／抗CD19diabody，并且能够进行可溶性表达，可与CD19Raji细胞*[3CD3Jurkat细胞特异结合，为以后的抗体功能实验奠定了基础。[关键词]基因工程抗体；双功能抗体；CD3；CD19；淋巴瘤；免疫治疗中图分类号：R730．3文献标识码：A文章编号：1007—3639(2010)04-0241—06Constructionandexpressionofanti·-CD3xanti—CD19bispecificdiabodyandanalyzingitsspecificbindingactivityLIWei，F

4、ANDong-mei．CHENGXin。SHIRui—zan．LIURong,RENSi-mei．WANGMin．yANGMing(TheStateKeyLaboratoryofExperimentalHematology,InstituteofttematologyandB1oodDiseasesHospital，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingionMedicalCol1eggTianjin30002~China)Correspondenceto：YANGMingE-mail：myl97o@i63．CON[A

5、bstract]Backgroundandpurpose：BispecificantibodyisaspecialpaRemofgeneticengineeringantibody．Itpossesses2antigenbindingsites，onedirectedattheefectercellsandtheotheratthetargetcellswhicharealwaysthetumorcells．Thisenablestheefectercellstorecruittothetargetseficientlyandexertcytotoxieeff

6、ect．Theexperimentwasaimedtoconstructtheexpressionvectorofanti-CD3xanti-CD19bispecificantibody,purificationandanalyzingtheactivityofthediabody．Methods：ApplyedPCRandoverlapPCRtoconstructtheexpressionvectorofanti—CD3xanti—CD19bispecificantibodies，transformeditintoE．coli16C9forexpressio

7、n．PurifiedthediabodybyHis—tagafinitychromatographyandconfirmedby12％SDS—PAGEandWesternblot．AntigenbindingactivityofthediabodywasanalyzedbyFACS．Results：TheDNAsequenceoftheexpressionvectorcontaininganti—CD3xanti—CD19fragmentwascomfirmed．Theyieldofpurifieddiabodywasupto5mg／L．Themolecula

8、rweightofdiabodywas