抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定.pdf

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1、2011年6月湖南师范大学自然科学学报Vo1．34No．3第34卷第3期JournalofNaturalScienceofHunanNormalUniversityJun．，2011抗蛔虫人源单链抗体库的构建及鉴定千守杜何光志，田维毅'^八I工'奚锦，俞高(1．贵阳中医学院基础部，中国贵阳550002；2．遵义医学院附属医院，中国遵义563003)摘要目的：构建抗蛔虫人源单链抗体库，从中筛选建抗蛔虫人源特异性单链抗体．方法：分离10个患蛔虫病人的淋巴细胞，提取总RNA反转录为cDNA，PCR扩增人抗体重链(VH)和轻链()

2、可变区基因，采用SOE-PCR法将VH和儿片段随机拼高接成琦scFv片段，并克隆人噬菌粒载体pCANTAB5E中，构建噬茵体单链抗体库．结果：初级库库容量为1．8X10，在大肠杆菌TG1中重组后得到1．6X10的次级抗体库．结论：本研究成功构建抗蛔虫人源单链抗体库，拟在为蛔虫英病，的乾王预防、诊断、治疗奠定基础．关键词蛔虫；单链抗体；构建及筛选中图分类号R383．王11宇文献标识码A文章编号1000-2537(20l1)03-0077-05P平re黄parationandIdentificationofaHumanSing

3、leChainFvAntibodyAgainstAscarislumbricoidesHEGuang-zhihTIANWei—yi，GAO，WANGPing，，WANGWen-jia，胁，Qi，WANGQian-yu，HUANGGao(1．DepartmentofBasicCourses，GuiyangCoHegeofTraditionalChineseMedicine，Guiyang550002，China；2．AfiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege，Zu~yi563003，Chin

4、a)Abstract0bjectiveToconstructhumanizephageantibodylibraryagainstAscarislumbricoidesandtoscreenspecificityscFvtoAscarislumbricoides．MethodsTotalRNAwasabstractedfromperipheralbloodlympho·cytesof20persons，andwasusedtoamplifyVHandVLgenebyRT—PCR．TheamplifiedVHandVLgen

5、esweresplicedtoformscFvgenewhichwasclonedintopCANTAB一5Ephagemid，andtheconstructedrecombinantphage—midwastransformedtoE．coliTG1toconstructhumannaturalsingle-chainantibodylibraryfromwhichpositivecloneswerescreened．ResultsAprimarylibraryof1．5X10andasecondlibraryof1．2

6、X10wereconstructed．ConclusionThisstudywastoprovideLISthebasisforradionuclideimagingandtherapyforascariasis．KeywordsAscarislumbricoides；single—chainantibody；preparationandidentification蛔虫(AscarislumbricoidesLinnaeus，1758)也称为人似蚓蛔虫，蛔虫病呈世界性分布，已经成为公共卫生问题之一⋯．据报道，全世界约有14

7、．72亿人感染蛔虫【．我国是蛔虫感染较严重的国家之一，近年全国人体重要寄生虫病现状调查资料显示，全国感染蛔虫人数为8593万．蛔虫对群众健康和青少年儿童的生长发育危害较大引．收稿日期：2011-01-20基金项目：贵州省优秀科技教育人才省长资金资助项目(黔省专合字[2010150号)$通讯作者。E．mail：heguangzhi7711@sina．eom78湖南师范大学自然科学学报第34卷噬菌体抗体库技术是抗体工程领域的最重要进展，各种小分子抗体相继产生，在疾病的诊断与防治、自身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别研究、肿瘤的影像

8、分析和导向治疗或基因治疗等多个领域有着潜在的优势．该技术具有简单易行、生产成本低、筛选容量大等优点引．本研究采用噬菌体抗体库这一生物学技术构建抗蛔虫噬菌体展示单链抗体库，拟在为以后应用于蛔虫病的预防、诊断和治疗方面奠定基础．1材料与试剂1．1主要试剂淋巴细胞分离液，购自为天津灏洋生物制品公司；逆转录试剂