抗人结缔组织因子人源单链抗体的筛选、表达及活性鉴定.pdf

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1、山东医药2013年第53卷第20期抗人结缔组织因子人源单链抗体的筛选、表达及活性鉴定周云，包林，金秋，张黎，蔡雪婷。，卢悟广。，曹鹏。，焦永军，张建平(1南京医科大学第二附属医院，南京210011；2卫生部肠道病原微生物重点实验室，江苏省疾病预防控制中心病原微生物研究所；3江苏省中医药研究院细胞与分子生物学实验室)摘要：目的从人源噬菌体抗体文库中筛选抗人结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(ScFv)，原核表达并鉴定其活性。方法以重组人源CTGF(rhCTGF)为靶标，对人源噬菌体抗体文库进行筛选；用Phage—ELISA筛选阳性克隆并进行原核表达、纯化，获得了

2、高纯度的ScFv蛋白，通过ELISA和Millice11迁移实验鉴定其活性。结果经过3轮筛选，获得1株特异性抗人CTGFScFv1C5，ELISA显示1C5能与rhCTGF特异性结合；在Millicell迁移实验中，1C5能抑制CTGF的生物学功能，具有中和活性。结论成功筛选到1株抗人CTGF的ScFv，有望在CTGF相关疾病的治疗上发挥作用。关键词：结缔组织生长因子；噬菌体展示技术；单链抗体；靶向治疗doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2013．20．005中图分类号：R392文献标志码：A文章编号：1002-266X(2013)20-0

3、015-04Screening．expressionandactivityidentificationofanti-CTGFhumansingle-chainFvZHOUYunL，BAOLin，JINQiu，ZHANGLi，CAIXue—ting，LUWu—guang。CAOPeng，ZHANGJian-ping，3lAoYongun(1eSecondAffiliatedHospitalofNanfingMedicalUnive~ity，Nanjing21001l，P．R．China)Abstract：ObjectiveToscreenanti—connecti

4、vetissuegro~hfactor(CTGF)humansin~e—chainvariablefragment(ScFv)fromhumanphageantibodylibrary，prokaryoticexpressionandtoidentifyitsactivity．MethodsThehumanphageantibodylibrarywasscreenedbyusingrhCTGFasthetarget，andthepositivecloneswereselectedbyphage-ELISAtoinduceitsprokaryoticexpress

5、ionandtopurifytheprotein，andthehighpurityScFvproteinwasobtained．ItsactivitywasidentifiedbyELISAandMillicellmigrationassay，respectively．ResultsAfterthreeroundsofscreening，only1clone，designated1C5，withgoodreactivitytorhCTGFwasselected．1C5wasfoundtobindhumanCTGFspecificallyinELISA，andin

6、hibitCTGF~functioninMillicellmigrationassay，indicatingitsneutralizingactivity．ConcisionAnanti·CTGFhumansin~e—chainFvclonewassuccessfullyidentified，whichcouldbeusedastherapeuticagentcandidateforCTGF-relateddisease．Keywords：connectivetissuegrowthfactor；phagedisplaytechnology；single—cha

7、inantibodies；targetedtherapy结缔组织生长因子(CTGF)是典型CCN家族膜、肝星状细胞、肺成纤维细胞、血管平滑肌细胞等(Cyr61，CTGF，Nov)中的一员，其主要功能有促进细合成分泌。CTGF具有明显的有丝分裂原性和趋胞的迁徙、黏附、细胞外基质(ECM)的生成以及调化性，可以调节成纤维细胞和系膜细胞外基质的分节细胞周期、分化、伤口的愈合。CTGF存在于许泌，在多种组织器官(如肾、肝、肺、皮肤等)纤维化多人体组织中，主要由皮肤成纤维细胞、肾小球系的进程中起重要作用]。除了促进一些组织器官基金项目：江苏省卫生厅科研项目(H200814

8、)；江苏省医学重点人才课