抗猪PD-L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析.pdf

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1、第35卷第7期中国预防兽医学报Vo1．35．No．72013年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．2013doi：10．3969~．issn．1008-0589．2013．07．16抗猪PD—L1分子的单克隆抗体制备及免疫学特性分析彭金美，李登云，郭娟娟，安同庆，孙艳，吴玉全，陈家锃，冷超粮，田志军，童光志‘(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001；2．中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病研究室，上海

2、200241；3．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100)摘要：为制备抗猪程序性死亡因子配体1(PD．L1)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其免疫学特性，本研究将猪PD．L1基因的外膜区利用原核表达载体pET32a进行表达，以纯化的表达蛋白免疫BALB／c小鼠，利用常规淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，以表达PD．L1Fc蛋白的293T细胞作为抗原，采用间接免疫荧光试验筛选杂交瘤培养上清，获得两株稳定分泌抗猪PD．L1MAb的杂交瘤细胞系。MAb亚型鉴定均为IgG1型，轻链为K链。Westernblot试验表明这两株MAb

3、均可以特异性识别PD．L1蛋白。流式细胞检测结果显示这两株MAb可以识别表达于293T细胞膜表面的PD．L1分子，但不能阻断PD．L1分子与其受体PD．1的结合。这两株MAb的获得为研究PD一1／PD．L1通路与猪的某些感染性疾病发展进程的关系提供了必要的检测工具。关键词：PPD．L1分子；PD．1／PD．L1通路；单克隆抗体中图分类号：$852．4文献标识码：A文章编号：1008．0589(2013)07．0578．04Preparationoftheanti--porcinePD--L1monoclonalantibodi

4、esandanalysisoftheirimmunologicalcharacteristicsPENGJin—mei，LIDeng-yun，GUOJuan-juan，ANTong—qing，SUNYan，WUYu—quan，CHENJia-zeng，LENGChao—liang，TIANZhi~un，TONGGuang-zhi(1．DivisionofSwineInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVeterinaryRese

5、archInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．DivisionofSwineInfectiousDiseases，ShanghaiVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Shanghai200241，China；3．CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestA&FUniversity，Yangling71210

6、0，China)Abstract：Topreparethemonoclonalantibody(MAb)againstporcineprogrammeddeath1ligand1(PD-L1)，theextracellulardomainofPD-L1wasexpressedbypET32ainE．coliandusedtoimmunizeBALB／cmice．HybridomaswereproducedbyfusingSP2／0cellswithspleencellsfromimmunizedmice．Twohybridom

7、aswereidendifiedbyindirectimmunoflurescenceassayusing293TcellswhichexpressingPD-L1-Fcastheantigen．BothMAbswereIgG1subtybewithKchain．WesternblotassayshowedthattheMAbswereabletorecognizePD—L1proteinsspecifically．TheresultsfromflowcytometryanalysisindicatedthattheMAbsw

8、ereabletodetectporcinePD-L1expressedonthecellmembraneof293T，butunabletoblockthebindingbetweenPD-L1withitsreceptorPD-1．Inconclusion，thesetw