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1、第30卷第4期扬州大学学报(农业与生命科学版)Vol.30No.42009年12月JournalofYangzhouUniversity(AgriculturalandLifeScienceEdition)Dec.2009抗朊蛋白单克隆抗体的免疫学特性研究1,22222223吴晓东,张永强,刘雨田,邹艳丽,刘珊,李林,王志亮(1.扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏扬州225009;2.中国动物卫生与流行病学中心2国家外来动物疫病诊断中心2国家牛海绵状脑病参考实验室,山东青岛266032)摘要:以牛、羊
2、重组朊蛋白(PrP)、正常牛、羊的脑组织匀浆、牛海绵状脑病(BSE)及羊痒病阳性的脑组织匀浆及切片为抗原,测定9株抗朊蛋白单克隆抗体的ELISA、免疫印迹及免疫组化等免疫学反应特性。结果表明:5株单抗可用于BSE及羊痒病的ELISA、免疫印迹检测;3株单抗可用于BSE及羊痒病的免疫组化检测;1株单抗在免疫印迹试验中只ScSc与羊痒病PrP的核心片段反应,结合该株单抗所识别的抗原表位PrP第78～93氨基酸(aa),证实BSE与羊痒病PrP的蛋白酶K消化位点存在差异。关键词:传染性海绵状脑病;朊蛋白;单克隆抗体;免
3、疫学特性中图分类号:S85214文献标识码:A文章编号:167124652(2009)0420006205ImmunologicalcharacteristicsofAnti2PrPMcAbs1,2222WUXiao2dong,ZHANGYong2qiang,LIUYu2tian,ZOUYan2li,222LIUShan,LILin,WANGZhi2liang(1.KeyLabofAnimInfDisofMOA,YangzhouUniv,Yangzhou225009,China;2.NatBSERefLab,Na
4、tDiagCenforExoticAniDis,CAHandEC,Qingdao266032,China)ABSTRACT:Inrecentyears,aseriesofanti2PrPmonoclonalantibodies(McAbs)hadbeendevelopedinourlab.Inthisresearch,9McAbsimmuno2reactivitieswithPrPweretestedinELISA,Westernblottingandimmunohistochemistry(IHC)assay.
5、Theresultsindicatedthat5McAbscouldbeusedforthedetectionofBSEandScrapieinWesternblottingandELISA,and3McAbscouldbeusedforthedetectionofBSEandScrapieinIHCassay.1McAbonlyrecognizedtheSccorepartofPrPfromsheepinWesternblotting,anditsepitopewaslocatedin78-93aaofPrP.
6、Therefore,itcouldScdifferentiatetheproteinaseKcleavagesiteofPrPfromBSEandScrapie.KEYWORDS:TSEs;PrionProtein(PrP);monoclonalantibody(McAb);immunologicalcharacteristics传染性海绵状脑病(TSEs)是存在于人和动物中枢神经系统慢性、退化性、致死性疾病,包括人的克[1]雅氏症(CJD)、羊痒病(Scrapie)、牛海绵状脑病(BSE)等。研究显示BSE甚至
7、可以感染猪。最近,又[225][6]报道了一种新型羊痒病因子Nor98及一种变异型BSE,提示新型TSEs不断出现。BSE与人变异型CJD在流行病学上存在关联[728],任何国家一旦发现1例BSE,其养牛业将受到沉重打击。近年来,BSE的全球发病总数虽然不断减少,但发病国家却在不断增加,BSE的流行呈现全球蔓延的趋势。TSEs的病原是一种缺少核酸的蛋白性感染颗粒,称为朊毒体(Prion),是宿主的神经和淋巴细胞表CSc面朊蛋白(PrP)的异构体(PrP)。TSEs特征性病理变化是神经纤维网空泡化、神经元损伤及脑内
8、朊[9210]CSc毒体大量积聚等,而且具有明显的宿主种属特异性及朊毒体的株系特异性。PrP与PrP具相同CSc的蛋白序列,但二级结构上存在着从α螺旋到β折叠的转变。PrP可被蛋白酶完全消化,而PrPC2端Sc150个左右氨基酸组成的核心片段(PrP27230)则能抵抗蛋白酶的消化,不同株系PrP的蛋白酶消化位点Sc及其糖基化模式有所区别。目前,PrP的蛋白酶抗性仍是大多
