红松种子仁组成蛋白抗体外抗氧化研究.pdf

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1、LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．12时珍国医国药2011年第22卷第12期红松种子仁组成蛋白抗体外抗氧化研究吴晓红，王宏伟，王振宇，，刘经纬(1．东北林业大学，黑龙江哈尔滨150040；2．哈尔滨工业大学，黑龙江哈尔滨150080)摘要：目的研究红松种子蛋白的抗氧化活性。方法采用UsbomeT．B经典方法制备红松种子4种组成蛋白，采用体外抗氧化实验研究其还原能力、抗氧化能力、清除·OH自由基能力。结果红松种子的4种组成蛋白均具有一定抗

2、氧化能力，其抗氧化能力随浓度的增加而增加，表现出一定的量效关系，清除·OH自由基的能力盐溶蛋白>水溶蛋白>碱溶蛋白>醇溶蛋白，4种组成蛋白均具有还原能力，水活性蛋白还原能力最强。结论红松种子蛋白在体外具有抗氧化作用。关键词：红松种子蛋白；抗氧化能力；清除·OH自由基能力；还原能力D0I标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2011．12．060中图分类号：R284．2文献标识码：B文章编号：1008-0805(2011)12-2961-02红松PinuskonaiensisSiebe

3、tZuce属松科植物，是我国东北地ml，加入2．5ml蒸馏水和0．5ml0．1％的FeC1，然后在700am区重要的经济树种，红松所结的种子红松种子富含营养，蛋白质波长处比色。含量在13％一20％，是一种优质的植物蛋白来源。目前，有人研2．3抗氧化能力的测定取一定质量浓度的样品1Oml，加入究发现红松种子蛋白具有抗衰老、提高免疫力、降血脂等生理功0．25ml的1mol／LH2SO4和5ml的0．25mol／LH202，室温下反应能。』。但对红松种子蛋白的抗氧化活性没有报道。因此，本文10rain，再加入10％

4、KI溶液20ml，暗处静置5rain，用0．05mol／L参照OsborneT．B的经典方法制备红松种子4种组成蛋白，对4Na：S：0滴定，以1％～2％淀粉溶液指示终点，同时做空白对照，种组成蛋白的体外抗氧化活性进行研究，为红松种子蛋白粉的开按下式计算抗氧化能力(AVO，mg／g)L6J：发和利用提供理论基础和实验依据。AVO=(V—V样)×c×34／0．11器材式中：V、V样——空白和样品消耗的Na2s20，的体积，单位：m1；1．1材料红松种子(购于黑龙江省伊春市)；去壳去红衣，传动c——Nfd，SO的浓

5、度，单位：mol／L杆法碾碎，索氏法脱去脂肪，得到脱脂红松种子粉。34——HO的摩尔品质，单位：g／tool磷酸氢二钠；磷酸二氢钠；铁氰化钾；三氯乙酸；三氯化铁；2．4清除·OH自由基的效果测定主要是Fention体系中对羟30％H20：；碘化钾；Na：S0，；可溶性淀粉；磷酸二氢钾；氢氧化基自由基的抑制率：在干净的磨口试管中一次加入50mol／L钾；EDTA；脱氧核糖；维生素C；硫代巴比妥酸TBA等均为分析pH7．5的KH2PO4一KOH缓冲液，0．4ml；一定浓度样品，0．1ml；纯。1．04mmol／L

6、EDTA溶液，0．1ml；10mmol／LH2O2，0．1ml；601．2设备PHO70A培养箱／干燥箱，上海益横试验仪器有限责mmol／L脱氧核糖(对照不加，补充蒸馏水)，0．1ml；2mmol／L任公司产品；TGL一16C高速台式离心机，上海安亨科学仪器厂维生素C，0．1ml；以及1mmol／L的FeC1，0．1ml，各管终体积产品；HHS电热恒温水浴锅，上海博迅实业有限公司医疗设备厂1．0ml。37℃保温1h后取出，加入1ml25％HC1终止反应，再加产品；722型可见分光光度计，上海光谱仪器有限公司产

7、品；ALC1．0ml1％硫代巴比妥酸TBA溶液，将每个试管中溶液混匀，沸一1104电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司产品；水浴中煮15rain，立即冷却，然后离心(3000r／rain)。在532nmPHS一3CPH计，上海伟业仪器厂产品；FD一1型冷冻干燥机，北波长处测吸光度，并按下列公式计算抑制率：京博医康试验仪器有限公司产品；85—2磁力搅拌器，上海浦东·OH清除率(％)=[A。一(A1一A2)]／A0×100％物理光学仪器厂产品。式中：An一对照的吸光值2方法A一加入样品的吸光值2．1蛋白质溶

8、液的制备红松种子去壳去红衣，传动杆法碾碎，A一样品空白的吸光值索氏法脱去脂肪，得到脱脂红松种子粉，将一定量的脱脂红松种3结果讨论子粉，按1：20的比例加入水，35％水浴并用增力电动搅拌器匀3．1比较红松种子蛋白各组分的还原能力见表1，图1。速搅拌90rain，然后以4000r／rain离心lOmin，取上清液，分别稀表1不同质量浓度红松种子组成蛋白还原能力释定容为5，10，50，100倍，将沉淀用蒸