酶-超声双辅助提取桑叶多糖的工艺研究.pdf

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1、黑龙江农业科学2015(5)：1O8～111HeilongjiangAgriculturalSciences酶一超声双辅助提取桑叶多糖的工艺研究牛学峰，詹微薇，应旭珍，沈朝阳，蔡彦贞，闵莉静(湖州师范学院生命科学学院，浙江湖州313000)摘要：为了优化桑叶多糖提取工艺，在纤维素酶、果胶酶联合作用下，利用超声辅助，通过单因素与正交试验，研究酶种类及用量、超声时间、超声温度、超声功率、乙醇浓度以及超声次数等因素对桑叶多糖提取产率的影响。结果表明：桑叶中多糖提取最佳条件为纤维素酶与果胶酶酶比例为1：2、乙醇比例2．5：1、超声时间6orain、超声温度8o℃、超声功率6Ow、超声次数3次。酶一超声

2、双辅助提取桑叶多糖能有效提高提取率和原料利用率。关键词：酶；超声；桑叶多糖；提取工艺中图分类号：Ts245．9文献标识码：A文章编号：1oO2-2767(2O15)O5—0108-04D：10．11942／i．issn1002-2767．2015．05．0108桑叶为桑科植物桑(MorusalbaL．)的干燥酸(AR，东莞市力冠化工有限公司)；纱布(300×叶。据中医药书籍记载，桑叶性昧苦、微寒，具有220×50，浙江省台州市恒泰染织敷料有限公司)疏散风热，清肝明目，肺热、燥咳等功效[1]。现代1．1．2仪器中药粉碎机(FZ102，天津泰斯特研究表明桑叶具有抗衰老、降血压、降血脂、降低仪器有限

3、公司)；恒温水浴锅(HH一501，上海乔胆固醇、抑制过氧化物和肠道有害细菌繁殖等独枫实业有限公司)；烘箱(DGG-9140B，上海泸升特功效，对人体有良好的保健作用[2-3]。现代药理实验仪器厂)；电子天平(AR423CN，上海研丰电和临床试验也表明：桑叶有效成分之一的桑叶多子科技有限公司)；旋转蒸发仪(RE-52A，盛泰仪糖具有显著的降血糖作用。器有限公司)；超声清洗仪(SK7200H，上海沪粤目前，桑叶多糖的提取主要为传统溶剂提明科学仪器有限公司)；紫外分光光度计(UV一取_4]、超声辅助提取[5]、微波辅助提取[6等，水体1100，上海美谱达仪器有限公司)。醇沉的方法虽然操作简单，但耗时

4、、耗溶剂、原料1．2方法利用率低，而超声辅助只是在溶剂法的基础上，利1．2．1酶一超声双辅助提取桑叶多糖桑叶，干用超声波空化作用破碎细胞壁，可以缩短提取时燥，粉碎，加蒸馏水浸泡过夜，加果胶酶／纤维素酶间，但对提取产率的帮助不大，本项目提出在超声作用2h，超声恒温水浴加热，4层纱布过滤得滤提取之前，加入纤维素酶、果胶酶，利用酶的生物液，浓缩，搅拌，滴加入乙醇溶液中，5000r·rain降解作用，破除细胞壁，有效帮助细胞中有效成分离心5rain，取上清液，分别用丙酮、无水乙醇、乙的溶出，从而有效提高原料利用率及产率。酸乙酯洗涤离心得沉淀，烘干。1．2．2单因素试验①酶种类与用量对桑叶多1材料与方法

5、糖产率的影响。分别称取5份桑叶粉末各5．0g，I．1材料放入250mL烧杯中，加水100mL，浸泡过夜，加1．1．1试剂水乙醇(AR，西陇化工股份有限公不同用量的果胶酶／纤维素作用2h，在8O℃下超司)；丙酮(AR，重庆茂业化学试剂有限公司)；乙声，超声功率为6OW，超声时间分别为2O、3O、酸乙酯(AR，广东省阳东县化工工业公司)；果胶4O、5O、60rain，4层纱布分别过滤得滤液，3次重酶(AR，江苏锐阳生物科技有限公司)；纤维素复操作，合并滤液，恒温浓缩至2OmI，磁力搅拌，酶(酶活50000U·g～，江苏锐阳生物科技有限公滴加入2．5倍体积95乙醇沉淀，以5000r·min司)；苯酚

6、(AR，东莞市力冠化工有限公司)；浓硫离心5min，取上清液，分别用丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯洗涤离心(5000r·mi离心5rain)，得沉收稿日期：2015—01—14淀烘干。基金项目：2014年浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划资助项目(2014R425016)将已提取的5份桑叶多糖各1g溶解，离心取第一作者简介：牛学峰(1993-)，男，内蒙古自治区呼和浩特上清，于500mL定容，加蒸馏水定容至刻度线，再市人，在读学士，从事天然药物提取研究。E-mail：niuxue—fengyou@qq．corn。依次移取5份桑叶多糖溶液2．00mL于25mL的1O85期牛学峰等：酶一超声双辅

7、助提取桑叶多糖的工艺研究比色管中，分别加人1．00mL6苯酚溶液及清液，分别用丙酮、无水乙醇、乙酸乙酯洗涤离5．00mL浓硫酸，静置10rain，摇匀，加蒸馏水至刻心(5000r·rain离心5rain)，得沉淀烘干。取度线，室温放置20rain，以蒸馏水作空白，于490样、定客，测吸光值，方法同①。nm处测吸光度，每个样品测2次，记录数据。⑥超声次数对提取桑叶多糖产率的影响。分②超声时间对桑叶多