水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S10的原核表达、多克隆抗体制备及应用.pdf

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1、中国水稻科学(ChinJRiceSei)，2010，24(1)：25～3Ohttp：／／www．ricesei．cnDO1：10．3969／j．issn．1001—7216．2010．O1．0525水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因S／O的原核表达、多克隆抗体制备及应用欧阳元龙1，2，3吴建祥2，熊如意3周益军3周雪平(南京师范大学生命科学学院，江苏南京210046；浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所，浙江杭州310029；。江苏省农业科学院植物保护研究所，江苏南京210014；’通讯联系人。E—mail：wujx@zju．edu．cn)Pro

2、karyoticExpressionofCoatProteinGeneSJ0ofRiceBlack—StreakedDwarfVirus，andPreparationandApplicationofItsPolyclonalAntibodyOUYANGYuan～longt·。，WuJian～xiang，，XIONGRu—yi。，ZHOUYi—jun。，ZHOUXue—ping。(CollegeofLifeScience，NanjingNormalUniversity，Nanjing210046，China；InstituteofBiotechno

3、logy，CollegeofAgriculture&Biotechnology，ZhejiangUniversity，Hangzhou3】0029，China；。InstituteofPlantProtection，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences—Nanjing210014，China；Correspondingauthor。E-mail：tc，ujx@“edu．cn)0UYANGYuanlong，WUJianxiang，XIONGRu—yi。eta1．Prokaryoticexpressionofcoa

4、tproteingeneS10ofriceblack—streakeddwarfvirus，preparationandapplicationofitspolyclonalantibody．ChinJRiceSci，2010，24(1)：25—30．Abstract：Theful1lengthcDNAofriceblack—streakeddwarfvirus(RBSDV)segmentl0(0)whichencodedcoatproteinwasclonedfromthevirusinfeetedricesamplesbyRT_PCR，ands

5、ubclonedintoaprokaryoticexpressionvectorpET32a．Therecombinantprokaryotieexpressionvector(pET-32a—CP)wasusedtotransformEscher&iacoliBI2l(DE3)．A76kDTrKAfusionproteinwasobtainedwithinductionofIPTGandpurificationofNi+NTAaffinitycolumn．Thepurifiedrecombinantproteinwasusedtoimmuniz

6、erabbitsforproductionofpolyclonalantibodiesagainstthecoatproteinofRBSDV．Usingpoly—clonalantibodies．immunocaptureRT—PCRandDot—blotELISAwereestablishedforreliable，sensitiveandspecificdetectionofRBSDV．Thetwodetectionmethodsutilizedpolyclonalantibodiesprovidetechnicalsupportforth

7、ediagnosisofRBSDVdis—ease．Keywords：riceblack—streakeddwarfvirus；prokaryoticexpression；polyclonalantibody；immunoeaptureRT—PCR；dot—blotE1ISA欧阳元龙，吴建祥，熊如意，等．水稻黑条矮缩病病毒外壳蛋白基因0的原核表达、多克隆抗体制备及应用．中国水稻科学，2OlO，24(1)：25—3O．摘要：用RT—PCR方法从感染水稻黑条矮缩病毒(riceblack-streakeddwarfvirus，RBSDV)水稻中克隆该病

8、毒的外壳蛋白基因S／0，然后将此外壳蛋白基因再豫克隆到原核表达载体PET一32a中构建成重组原核表达载体pET32a—CP。将重组表达载