水稻乙醇酸氧化酶基因OsGLO1的原核表达及多克隆抗体制备.pdf

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1、第31卷第3期华南农业大学学报Vo1．31．No．32010年7月JournalofSouthChinaAgriculturalUniversityJu1．2010水稻乙醇酸氧化酶基因OsGLO1的原核表达及多克隆抗体制备张建军，胥华伟，周晓垂，王玉琪，彭新湘(1华南农业大学生命科学学院，分子植物生理研究室，广东广州510642；2河南科技大学农学院，河南洛阳471003)摘要：乙醇酸氧化酶是光呼吸代谢的关键酶．以水稻Oryzasativa叶片cDNA为模板，利用RT—PCR扩增水稻乙醇酸氧化酶基因(O

2、sGLO1)，并构建了该基因的原核表达载体pET23d—OsGLO1，转化E．coliBI21(DE3)，经IPTG诱导表达融合蛋白．以纯化的OsGLO1融合蛋白为抗原免疫新西兰白兔，制备兔抗OsGLO1的多克隆抗体．Western—blot分析表明，制备的多克隆抗体能有效地检测水稻、菜心Brassicacampestris、拟南芥Arabidopsisthaliana和菠菜Spinaciaol—eracea中乙醇酸氧化酶的表达，为进一步深入研究乙醇酸氧化酶在调控光呼吸及抗逆性等方面的作用奠定了基础．关

3、键词：水稻；乙醇酸氧化酶；原核表达；多克隆抗体中图分类号：Q945．11文献标识码：A文章编号：1001—411X(2010)03一O113—03ProkaryoticExpressionandPreparationofPolyclonalAntibodyofGlycolateOxidaseGeneOsGLO1fromRiceZHANGJian-jun，XUHua．wei，ZHOUXiao．chui，WNAGYu—qi，PENGXin—xiang(1LaboratoryofMolecularPlantP

4、hysiology，CollegeofLifeSciences，SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China；2CollegeofAgriculture，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang471003，China)Abstract：Glycolateoxidase(GLO)isakeyenzymeinphotorespiratorymetabolism．OsGLO1wasampli—f

5、ledbvRT—PCRfromriceleafcDNAandclonedintoaprokaryoticexpressionvectorpET23d．Therecom．binantplasmidwastransformedintoEscherichiacolBL21(DE3)andtheexpressionofrecombinantpro—teinwasinducedbvIPTG．erpurification．itwasusedastheantigentoimmunearabbitandthenpoly

6、—clonalantibodywasobtained．Western．blotanalysisconfirmedthatthepolyclonalantibodywasabletorecognizetheGLOproteinsfromdifferentplantspecies，suchasrice，cabbage，arabidopsisandspinach．ThisworklaidafoundationforfunctionalstudiesofGLOinregulatingphotosynthesis

7、understresses．Keywords：rice；glycolateoxidase；prokaryoticexpression；polyclonalantibody乙醇酸氧化酶(Glycolateoxidase，GLO)是光呼的基因，华南农业大学分子植物生理实验室利用诱吸代谢的关键酶1-3]，GLO催化乙醇酸氧化生成乙醛导反义RNA技术研究了水稻乙醇酸氧化酶基因酸，也可以催化乙醛酸氧化生成草酸¨J．自1948年(OsGLO1)的表达，发现GLO活性的下调会导致光合苏联学者首次报道GLO以来，对GL

8、O的研究主要集速率的下降，且二者呈明显的线性关系J，说明G中在其分子结构和催化特性方面剖．光呼吸途径中LO1是调控GLO的关键基因之一．为了深入研究通过GLO反应产生大量H：O，HO：在植物信号转GLO的功能，本研究构建了OsGLO1的原核表达载导及诱导抗逆性等方面都具有重要作用；生物信体，在大肠杆菌中表达并纯化后免疫新西兰白兔，制息学的分析表明，水稻中存在着多个可能编码GLO备相应的多克隆抗体，以水稻Oryzasativa、拟南芥收稿日期