水牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析.pdf

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1、农业生物技术学报，2010年，第l8卷，第3期，第610—615页JournalofAgriculturalBiotechnology,2010，Vo1．18，No．3，610—615技术改进UpdatedTechnology水牛^y一干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析徐贤坤熊毅刘棋曾宪垠2’龙剑明31广西动物疫病预防控制中心，南宁，530001；2四川农业大学生命理学院，雅安，625014；3广西大学动物科学技术学院，南宁，530005通讯作者．xyzeng@sicau．edu．cn；lqzz888@

2、sina．tom摘要将原核表达的重组水牛(Bubalusbubalis)一干扰素成熟蛋白(IGST—WBWN-x)以100g／只剂量免疫8周龄Balb／c小鼠(musmusculus)，经5次免疫后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，以rHIS．WB．IFN—和rGST—WBITN-~／蛋白共同作为检测抗原进行间接ELISA检测，筛选并最终得到了2株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株(分别命名为1E4和4A11)，分泌抗体亚型均为IgG1型，轻链均为K链。Western-blot．ting检测显示：2株

3、单克隆抗体与原核表达的r'~rBIFN．^y蛋白均能特异性结合，具有良好的免疫反应原性。关键词一干扰素，水牛，单克隆抗体PreparationandAnalysisofMonoclonalAntibodiesagainstWaterBuffaloInterferon．gammaXuXiankunXiongYiLiuQi’ZengXianyinLongJianming1GuangxiCenterforAnimalDiseasePreventionandControl，Nanning，530001；2Col

4、legeofLifeScience，SichuanAgriculturalUniversity,Yaan，625014；3CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning，530005‘Correspondingauthors，xyzeng@sicau．edu．en；lqzz888@sina．conlDOI：10．3969／j．issn．1674—7968．2010．03．031AbstractBALB／cmice(J7l淞m／．

5、~C淞)wereimmunizedfivetimesbypurifiedrecombinantbufa1o(Bubdusbubalis)interferon-gamma(rGST—WBIFN—)expressedinEscherichiacoliBL21(DE3)atadoseof100Ixgpermice．Murinemyelomasp2／0cellswerefused、^，ithsplenocytesfromtheimmunizedmice．AnindirectELISAUS—ingrecombin

6、antproteinrHIS—WBIFN一andrGST—WBIFN一ascoatingantigenwereusedtoscreenanti—body-producinghybridomas．Twohybridomascellstainscouldsteadilyproducemonoclonalantibody0VlcAbs)af-ter4cyclesofsubcloning．BothMcAbsblongingtoIgG1isotypeandKchain，showedpositivereaction

7、torHIS—WBIFN一^yinwesternblotting．KeywordsIFN一^v，Bufalo，Monoclonalantibody(McAb)一干扰素(WN一)具有免疫调节、抗病毒、抗肿(Cerrettieta1．，1986)，国内外陆续开展和制备抗牛瘤、影响细胞分化等多种生物学功能，在免疫应答中IFN一的McAb(李瑞芳等，2006)，并在特异性玎FN一^y具有重要作用。抗IFN一的单克隆抗体(McAb)作为单克隆抗体的基础上建立起抗原特异性ELISA方一种重要的研究、检测刀一^y的手

8、段，已被广泛应用法，对样本中的刀～进行定性定量分析。牛刀FN一于免疫机制研究(vanderMeideeta1．，1990)、疫苗免(BoIFN一)单抗在牛疫病检测中具有重要的价值，应疫效果评估(Rodrfguezeta1．，1998)、免疫功能检测用最为广泛的是在牛结核病的检测方面(Woodeta1．(Tary-tehmanneta1．，1998)等领域。自从牛一干扰1990)。与传统皮内变态方法(TST)相比，抗原特异性素(BoIFN一^