细胞因子受体-抗人AFP嵌合抗体融合蛋白的构建及表达.pdf

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1、2008年l0月四川大学学报(自然科学版)Oct．2008第45卷第5期JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition)Vo1．45No．5文章编号：0490—6756(2008)05—1253—05细胞因子受体一抗人AFP嵌合抗体融合蛋白的构建及表达吴静，张平，周昌华2，赵宗容，魏大鹏，章崇杰(1．四川大学华西基础与法医学院免疫学教研室，成都6100412．成都市血液中心，成都610041)摘要：用RT—PCR方法从人胎肝组织中扩增EpoR胞外区基因及gpl30跨膜区基因，并用酶切连接方法将其与抗人AFP嵌合抗体

2、拼接，连接到质粒pVITRO上，构建真核表达栽体．将重组质粒转染CHO细胞，以RT—PCR、Westernblot和ELISA方法检测融合蛋白的表达。结果显示稳定转染细胞株有约150kDa的融合蛋白表达．关键词：EpoR；gpl30；AFP；嵌合抗体；融合蛋白；表达中图分类号：R392文献标识码：AConstructionandexpressionofthecytokinereceptor-antihumanAFPchimericantibodyfusionproteinWUJing，ZHANGPing，ZHOUChang-Hua，ZHAOZong-Rong，WE

3、IDa—Peng．ZHANGong-Jie(1．DepartmentofImmunology，CollegeofPreclinicalandForensicMedicine，SichuanUniversity，Chengdu610041，China；2．ChengduBkv,dCenter，Chengdu610041，China)Abstract：ExtracellularregionofEpoRgeneandtransmembranedomainofgpl30genewereclonedbyRTPCRmethodfromhepatictissueoffetus，

4、andthetwogenesweresplicedtoantihumanAFPchimericanti．bodybyendonucleasedigestion．ThenchimericlightchainandheavychainwereligatedintopVITROsepa～ratelytoconstructpVITRO—E—g—Igvector．EukaryoticexpressionvectorwastransfectedintomurineCHOcellsusinglipofectin．Expressionofthefusionproteinwasan

5、alyzedbyRT—PCR，WesternblotandEIISA．Thecytokinereceptor—antihumanAFPchimericantibodyfusionproteinwasconstructedandexpressedsue．eessfully．Keywords：EpoR，gpl30，AFP，chimericantibody，fusionprotein，expresion来源于小鼠，使其在体内的应用受到一定限制，因1引言此需对单克隆抗体进行人源化改造．在抗体的制备单克隆抗体技术在生命科学研究及临床疾病过程中，抗体的表达载体系统多采用二氢叶

6、酸还原检验、治疗等方面的应用广泛，然而单克隆抗体多酶(DHFR)基因作为可扩增选择标志基因，同时在收稿日期：2008—07—30；修回日期：2008—08—12基金项目：四川大学创新基金(2004CF09)作者简介：吴静(1978一)，女，陕西汉中人，医学硕士，研究方向为肿瘤免疫通讯作者：章崇杰．E—mail：CJZimng49@hotmail．com四川大学学报(自然科学版)第45卷培养基中加人甲氨蝶呤(MTX)来得到高拷贝量的军总医院王琰教授惠赠．质粒pVITRO购自美国抗体表达⋯1．但是，MTX具有细胞毒性，会抑制细InvivoGen公司．抗人AFP单链抗体

7、表达载体胞生长、引起细胞形态改变[21．为了这一因素对细pET32／ScFv由本室构建．中国仓鼠卵巢细胞株胞的影响，日本学者M．Kawahara等人在2003年(CliO)由本室保存．成功构建了抗原介导的遗传修饰细胞扩增体系2．1．2实验标本标本来源于人胚胎肝脏组织，(antigen．mediatedgeneticallymodifiedcellamplifi．均取自非疾病死亡的引产胎儿，胎龄28周，胚胎的cation，AMEGA)，将抗体的VL、VH与EpoRD2使用已得到医院和产妇的同意．功能区和gpl30跨膜功能区嵌合表达于细胞膜上，2．1．3主要试剂TRI

8、ZOLRe