黄杆菌肝素酶Ⅱ重组菌培养条件的优化及高密度发酵.pdf

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1、生物工程学报周斌等／黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵ChineseJournalofBiOtechn010gyhttp：／／journals．im．ac，cn／cjbcnApril25，2014。30(4)：674—678DOI：10．13345／j．cjb．130414~2014ChinJBiotech，Allrightsreserved黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵周斌，程咏梅，邓超2刘卫超，陈潮梁，陈敬华1，许正宏1江南大学药学院，江苏无锡2141222江南大学无锡医学院，江苏无锡214122

2、周斌，程咏梅，邓超，等．黄杆菌肝素酶II重组菌培养条件的优化及高密度发酵．生物工程学报，2014，3O(4)：674—678．ZhouB，ChengYM，DengC，eta1．CultureconditionsoptimizationandhighcelldensityfermentationofrecombinantbacteriaproducingheparinaseIIfromFlavobacteriumheparinum．ChinJBiotech，2014，3O(4)：674—678．摘要：黄杆菌肝素酶II(HepII)是一

3、类可特异性切割肝素、硫酸乙酰肝素类分子内连接键的酶。文中对黄杆菌肝素酶II重组菌的诱导时机、诱导剂添加量、诱导温度、诱导时间等诱导产酶条件进行优化。经过优化最佳摇瓶发酵产酶条件为：37oC培养重组菌至对数生长前期，添加诱导剂IPTG至终浓度为0-3g／L，20℃下诱导10h，酶活达到最高，为570U／L。在此基础上通过发酵罐高密度培养手段将菌体浓度OD600进一步提高到98，酶活大幅度提高到9436U／L，该研究结果为HepII的工业化生产与应用奠定了良好的基础。关键词：肝素酶II，培养条件优化，高密度发酵CuUlturecondi

4、tilonsoptimizationandhig2hcelldensityfermentationofrecombinantbacteriaproducingheparinaseIIfromFlavobacteriumheparinumBinZhou，YongmeiCheng，ChaoDeng，WeichaoLiu，ChaoliangChen，JinghuaChen，andZhenghongXu1SchoolofPharmaceuticalScience，JiangnanUniversity，Wuxi214122，Jiangsu，C

5、hina2WuxiMedicalSchool,JiangnanUniversity，Wuxi214122，Jiangsu，ChinaAbstract：HeparinaseIJ(HepIIfromFlavobacteriumheparinumiSanenzymethatcouldspecificallycleavecertainsequenceofheparinandheparansulfate．Inthiswork，fermentationconditionsofrecombinantheparinaseII(His．HepII1p

6、roducingbacteriawereoptimized，includinginitialinductiontime，inducer(IPTG)concentration，inductiontemperatureandinductiontime．Theoptimumconditionswereasfollows：cultivatingrecombinantbacteriatoexponentia1prophaseunder37℃．thenaddingIPTGtoafinalconcentrationof0_3g／L，finally

7、cultivatingrecombinantbacteriaunder2O℃f0rl0h．Thetotalcrudeenzvmeactivityreached570U／L．Basedontheseresults．higheelldensityfermentationofrecombinantbacteriawasstudied．Thefinal∞600couldreach98andthetotalcrudeenzymeactivityofHis。HepIIincreasedto9436U／L．Keywords：heparinaseI

8、I，cultureconditionsoptimization，highcelldensityfermentation肝素酶是指一类作用于肝素或者硫酸乙酰肝素主要为肝素酶I、II、III三种”。其中肝素酶Ⅱ有的多糖裂解酶。目前从肝素黄