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1、肝素黄杆菌肝素酶性质探究摘要：目的研究肝素酶I的理化性质。方法测定肝素酶I的相对分子质量、等电点、紫外吸收光谱、N端序列，以及各种环境因素对酶活性和酶稳定性的影响。结果相对分子质量约为43X103,等电点为8.5oN端序列不能测到。酶的最适催化条件为：温度45°C,pH6.4~7.0,离子强度150mmol/Lo酶在35°C以上极易失活，在pH7^11之间基本稳定。该酶的最大紫外吸收位于280nmoH202(1mmol/L,10mmol/L),NaN3(lOmmol/L,lOOmmol/L),乙睛(1%,10%),1mol/L盐酸肌和1mol/L尿素对酶的
2、活性无影响；1%SDS,4mol/L盐酸肌和4mol/L尿素则使酶完全失活；Ca.C12和MgC12是该酶的激活剂，FeC12则对该酶的活性具有抑制作用。结论通过实验，测定了肝素酶I的主要理化性质。关键词：肝素黄杆菌；肝素酶I;理化性质中图分类号：R977.3文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)02-0014-04CharacterizationofFlavobacteriunheparinumHeparinaseIMAXiao-lai,YUANQin~sheng(StateKeyLaboratoryofBioreactorEnginee
3、ring,EastChinaUniversityofScienceandTechnology,Shanghai200237,China)Abstract:ObjectiveTostudyphysico-chemicalpropertiesofheparinaseI.MethodsPropertiesoftheenzymeincludingrelativemolecularmass,isoelectriepoint,N-terminalaminoacidsequence,optimaltemperatureandpH,UVabsorbance,andthei
4、nfluenceoftheenvironmentfactorsonactivityandstabilityoftheenzymeweredetermined.ResultsTheenzymehadarelativemolecularmasof43X103andtheplwasabout8.5.TheN-terminalaminoacidsequencecouldnotbedetermined.IthadanactivitymaximumatpH6・4~7.0and41°C.TheenzymewithamaximumUVabsorbanceat280nmwa
5、sverysensitivetothermaldenaturationattemperatureupto35°C.H202(lmmol/L,10mmol/L),NaN3(10mmol/L,100mmol/L),acetonitrile(1%,10%),lmol/Lcarbamidinehydrochlorideandlmol/Lureahadnoinfluenceontheactivityoftheenzyme・Theenzymewassensitiveto1%SDS,4mol/Lcarbamidinehydroclorideand4mol/Lurea.C
6、aC12andMgC12weretwoactivatorsoftheenzyme,whileFeC12wasaninhibitor.ConclusionThemainphysico-chemicalpropertiesofheparinaseIareclearbyexperiments.Keywords：Flavobacteriunheparinum；heparinaseI；physico-chemicalcharacterization肝素酶(heparinase)是指一类能够特异性地裂解肝素和类肝素主链糖昔键的酶，可以清除血液中的肝素，并常用于测定肝素
7、的结构以及抗肿瘤等方面的研究［1-3］o肝素酶最初从肝素黄杆菌中发现并分离，后来发现其他一些微生物或动物组织中也存在［4］。近年，肝素酶用于低分子肝素生产和链上精确结构的研究很多。目前国际上约有3家公司售卖肝素酶，都是肝素黄杆菌肝素酶，价格昂贵。我们在肝素黄杆菌菌种保存、发酵生产、以及分离纯化方面做了大量工作。先后采用2种新的纯化工艺［5,6］分离得到电泳纯的肝素酶I,最高活性收率达到18%,高于其他报道。为了便于在科研和工业生产中应用此酶，我们对其性质作了详细的研究。1材料1.1样品肝素酶，本室纯化至电泳纯，比活为90U/(mg❷pro)。1.2仪器分光
8、光度计(Unico公司)1.3试剂NaN3,乙晴,NaCI,CaC
