铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究.pdf

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1、国际流行病学传染病学杂志2014年8月第4l卷第4期InterJEpidemiolInfectDis，August2014，V01．41，No．4·249·铝吸附甲型肝炎灭活疫苗抗原解离方法研究王静华潘海桦顾春燕【摘要】目的建立铝吸附甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗中甲肝病毒(HAV)抗原的解离方法。方法选择2O％二乙醇胺1．25mL、10％TritonX-1000．2mL和PBS8．55mL混合液作为解离液A；pH7．2的3％(w／v)柠檬酸缓冲液作为解离液B；20％(w／v)柠檬酸三钠为解离液C。分别检测3种解离液在不同的解离条件下对铝佐剂甲型

2、肝炎灭活疫苗的解离情况，用ELISA法检测解离后的HAV抗原含量，计算抗原回收率，确定最佳解离液及解离条件，并验证其可重复性。结果3种解离液HAV抗原解离试验显示，解离液C在室温(20~28℃)条件下解离1h，HAV抗原的回收率最高，可达95％及以上，重复试验的变异系数均<10％。结论20％(w／v)柠檬酸三钠可作为铝佐剂甲肝灭活疫苗的首选抗原解离剂，该解离剂配方简单，操作简便，结果重复性好，准确度高。【关键词】肝炎病毒，甲型；灭活疫苗；解离液；铝佐剂；ELISAAmethodforantigendissociationofhepatiti

3、sAvirusinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantWangJinghua*,PanHaihua,GuChunyan．*InstituteofViralDisease，ZhejiangAcademyofMedicalSc&nces，Hangzhou310013,ChinaCorrespondingauthor：GuChunyan，E-mail：gcy1358@163．com【Abstract】ObjectiveTodevelopamethodforantigendissociationan

4、dcontentdeterminationofhepatitisAvirus(HAV)inactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvant．MethodsBufferA：20％diethanolamine1．25mL，1O％TritonX一1000．2mL，andPBS8．55mL；bufferB：3％w／v)citricacidwithpH=7．2；bufferC：20％(w／v)trisodiumcitrate．Theabove3bufferswereusedtodissociateHAVinact

5、ivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantinvariousconditions．ThecontentofantigenofthoseresultantsampleswasdeterminedbyELISA，andthentherecoveryratewascalculatedtodeterminethebestbufferandconditionsofdissociation．Therepeatabilityofestablishedmethodwasverified．ResultsDissociat

6、iontestshowedthatwhenHAVinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvantwastreatedwithbufferCat20·28℃for1hour．therecoveryratewasthehighestof95％orabove．Coefficientofvariationofrepeatedtrialswaslessthan10％．Conclusions20％(w／v)tfisodiumcitrateisthebestbufferfordissociatingantigen

7、fromHAVinactivatedvaccinecontainingaluminiumadjuvant．Thebufferiseasytoprepareandoperatewithgoodreproducibilityandhighaccuracy．【Keywords】HepatitisAvirus；Inactivatedvaccine；Dissociationbuffer；AluminiumAdjuvant；ELISA铝佐剂在甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗中的应用HAV抗原含量，体外法大大缩减了检测周期，但铝已有多年，铝吸附的甲肝灭活疫苗中抗

8、原含量是体佐剂吸附的疫苗不能直接用于抗原含量测定，需将现疫苗效力的最重要指标，早期疫苗的效力试验通病毒抗原与铝佐剂解离出来后再进行检测l2】。而过动物体内法进行测定。《中华人民共