浓度对数和Ct值在HBV-DNA定量检测室内质控中的应用.pdf

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1、·3284·现代医药卫生2013年1t515日第29卷第21期JModMedHealth，November15，2013，Vo1．29，No．21·诊疗技术与方法·浓度对数和Ct值在HBV．DNA定量检测室内质控中的应用李引钰(成都大学附属医院检验科，四川成都611730)【摘要】目的探讨浓度对数和Ct值两种参数在乙肝病毒一脱氧核糖核酸(HBV—DNA)定量检测室内质控中的应用方法分别以室内质控品浓度对数和Ct值的均值、标准差绘制Levery．Jennings质控图。结果以质控品浓度对数为参数分析质控结果时出现22S失控；而以Ct值为参数分析质控结果时未发现失控。结论以质控

2、品浓度对数为参数分析室内质控较Ct值更为敏感。能更好地保证HBV．DNA定量检测的质量。【关键词】肝炎病毒，乙型；核酸类；质量控制；浓度对数；Ct值doi：10．39696．issn．1009．5519．2013．21．05l文献标识码：B文章编号：1009—5519(2013】21．3284—02随着医疗制度的完善以及医疗制度的改革。各级医院要在竞18．21和1．07，以其绘制质控图，见图2。分析未发现失控。争日益激烈的医疗市场中占有一席之地，就必须提高医疗质量，21I42完善服务措施和态度。检验医疗质量与临床的诊治息息相关，其2n3S在医疗工作中的地位也日益加强。乙型肝

3、炎是一种严重危害人类著~9．28=暮l8．2l健康的传染病，我国又是乙型肝炎大国，乙肝病毒一脱氧核糖核酸鬈17．14(HBV—DNA)作为乙肝病毒感染和复制的特异性指标，其检测结t6O7果直接关系到临床的预防、诊断、治疗及愈后判断f1]。荧光定量聚15l3579l1l3lSI7l92l232S27293l3335合酶链反应法(FQ．PCR)敏感度高，特异性强，所采用的尿嘧啶．室内旗控批次N一糖基化酶(UNG)防污染技术和荧光探针标记闭管检测技术也图2以ct值对数为参数绘制的质控图有效控制了假阳性的发生日，但影响因素仍较多。开展室内质控(internalqualitycont

4、rol，IQC)能有效地保证临床样本测定结果的结果发现．利用Ct值绘制质控图时没有发现失控的质控批次。准确性及稳定性。而确定一个更能准确反映室内质控状态的指标而利用质控品的浓度对数绘图时发现22S失控。就成为当务之急。3讨论1材料与方法在全面质量管理体系中，实验室室内质量控制是一个重要的1．1材料来源收集本科分子生物学实验室2011年5—8月连环节Pl。坚持室内质控能监测和控制实验室常规工作的精密度，也续35批次的HBV—DNA检测室内质控结果。实验所用试剂由中就是实验室测定的批内和批问重复性：其结果也决定了实验室即山大学达安基因公司提供，室内质控品为本实验室自制临界浓度时

5、测定结果的可靠性和有效性。确定一个更能准确反映室内质控血清，浓度为2．75x10copies／mL。状态的指标就成为当务之急。HBV．DNA作为诊断和监测乙肝疗1．2质控图绘制利用Levery．Jennings质控图法．以每批次室内效的特异性指标，其检测的影响因素较多。除了仪器和试剂因素质控得到的质控品的浓度对数作为计算数据。计算质控品浓度对外，实验室条件、标本因素、核酸提取方法等也是非常重要的[41。数的均值()和标准差(s)，并绘制质控图；同时以测得的质控品保证检验质量就成为检验人员工作的重中之重。Ct值的和s绘制质控图．分析这两种质控图。对以往的室内质控数据进行回顾性

6、分析时发现，以浓度对数1．3评价标准保证每批实验试剂空白和阴性对照均没有扩增为参数绘制质控图时出现22s失控，而以Ct值为参数时却未出产物产生。Ct值不出现任何数值．荧光曲线应位于阈值线下部无现。分析这两次实验：标准曲线正常，相关系数r>0．99，斜率和截扩增。距均在允许范围内，试剂空白和阴性对照Ct值均为0，这都符合2结果日常工作中分析判定结果的要求。但这两次质控所测得的值分别2．1质控品浓度对数绘制质控图质控品浓度对数的和s分是4．94、4．96，都是高于2S上限(4．88)。经分析查找原因发现，这别为4．44和0．22，以其绘制质控图，见图1。分析发现有2个批次两次实

7、验均为新进工作人员操作，由于缺乏工作经验，处理室内的质控品Ct值连续超过2s，为失控。质控时未充分震荡混匀，导致吸取的液体浓度偏高；另外由于质控品冷冻保存，恢复室温后样本盖上附有水珠，加样前未经瞬离，故质控品的浓度升高。且这两次实验恰属两个月份。所以进行质控总结时未发现。由此可见，及时采用统计学方法分析判断质控样本的测定结果是否偏出允许范围是室内质控工作的核心，可以及时发现和纠正实验过程中可能出现的错误。除此以外，还应定期评价累积数据以监测在测定操作中的长期变化趋势。不能只13579I113lS1719212325