浅谈 ELISA 法检测抗戊型肝炎病毒 IgM 抗体.pdf

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1、128世界最新医学信息文摘2014年第l4卷第8期·医学检验·浅谈ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体王爰(黑龙江省七台河市妇幼保健院，黑龙江七台河154600)摘要：目的探讨ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体。方法运用ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体。结论检测时应严格按照说明书要求操作，防止交叉污染。关键词：检测馀验；ELISA法；戊型肝炎；病毒抗体中图分类号：R446．1文献标识码：BDOI：10．3969~．issn．1671—3141．2014．09．0950引言4．4加酶标记物将HEV蛋白结构区的3种重组抗原成分，包被于聚苯除空白孔外，其

2、余孔各加1OOffl酶标记物。乙烯酶标板的反应孔中，加入待测血清或血浆，经孵育若4．5孵育及洗涤存在特异性抗体将与固相的HEV抗原结合I”。充分冲洗反37cC水浴孵育30min，用洗板机洗板。洗板机先吸去板应孔以祛除未结合成分，再将辣根过氧化物酶标记的鼠抗孔内液体，再以洗涤液注满各孔静置lmin后吸干，如此反人IgM抗体加入反应孔中，酶结合物将结合到先前形成的复洗涤5次。抗原抗体复合物上，反复冲洗反应孔，祛除未结合的酶结合4．6加底物物，然后向每孔中加入底物液一一四甲基联苯胺(TMB)溶液。加TMB底物100l／孔，37℃闭光显色10min，加终如果反应体系有蓝色反

3、应，说明有HE~特异性抗体的存在止液50l／孔。I2]4．7检测0D值l标本采集用MK2酶标仪比色，以450nm(单波长)或450nm／630nm(双波长)测各孔OD值。应用新鲜的动脉血或静脉血2～3ml，离心(1500～3000r／min)分离血清。不能马上进行检测的标本4．8结果审核在LIS系统审核结果。应置于2～8℃保存，保存时间不能超过3d。样本中不可添加叠氮钠进行防腐，一旦加入叠氮钠，就会会影响标本5质量控制中辣根过氧化物酶的活性，影响检测结果。5．1测定频率2试剂每批标本都应设置阴、阳性对照。s为样品OD值，CO为临界值fCut—off)。2．1试剂来源

4、戊型肝炎病毒IgM抗体诊断试剂盒(由北京万泰生物5．2接受标准技术有限公司提供)。当临界值血清的s／CO值超出X±2s范围时，系统处于警告状态，应予注意；当临界值血清的S／CO值超出2．2试剂组成包被板12孔X8条，直接使用，板条量按需进行检测32±3s范围时定为失控，则参照免疫科室内质控失控处理的人数进行调整；阳性对照血清、阴性对照血清各160l程序进行失控原因的排查。／瓶，稀释液100ml／瓶，TMB底物、终止液各30ml／瓶，5-3检测完成后使用前须使液体的温度恢复到室温水平，完全摇匀后保存在ELISA项目室内质控记录表上进行记录；参照于2～8℃；酶结合物70

5、ml／瓶，使用前根据标本量取出Levey—jennings质控图控制，若有失控，则应撰写报告，找适量，将酶原液按1：200配制成应用酶结合物，使用后保到失控原因进行处理。存于2—8℃；浓缩洗涤液120ml／瓶，用前以新鲜蒸馏水5．4质控品于2～8~0保存或去离子水稀释25倍后备用，若有结晶，应置室温溶解后开封后需在1周内用完。使用前需置室温20min，并充再稀释备用。分振荡、摇匀。2．3质控品6注意事项为试剂盒提供的阴阳对照。用前试剂盒各组分应在室温中平衡后再开封启用。3仪器每个阳性对照孑L的吸光度与空白对照孔的吸光度的差值LD5—10B型离心机；2510变频振荡器

6、；恒温水浴箱；必须≥0．500。空白对照孔的吸光度应≤0．100。EGATE一2310洗板机；MK3酶标仪。阳性对照孔和阴性对照孔的平均吸光度差值(Rcx—4操作步骤NRCX)应≥0．400，提示检测结果可靠。否则应怀疑技术问题，检测必须重新进行。4．1加样品稀释液除空白孔外，各孔分别加入200l样品稀释液。如果RCX—NRCX值持续偏低，应怀疑试剂变质。4．2加样7方法的局限性设空白1孔，阴、阳性对照各2孔。除空白孔外，分别如标本经实验室重复检测仍经呈阳性，就可认定样本加人10l阴、阳性对照物。样品孔加入10l样品。中有HEVIgM抗体，若检测阴性结果表明样本中没

7、有HEV4．3孵育及洗涤IgM抗体，却出现阴性结果，则不排除感染HEV的可能。37℃水浴孵育30min，用洗板机洗板。洗板机先吸去板此外，此种试剂盒也可能出现假阳性结果，这种结果的由孔内液体，再以洗涤液注满各孔，静置lmin后吸干，如此试剂盒的灵敏度和特异性决定。反复洗涤4次。经过临床实验还没有发现风湿因子和高滴度的IgG会世界最新医学信息文摘2014年第14卷第8期129影响HEVIgMELISA试剂盒的性能，用IgG去除法f如9临床意义RFRR)需要稀释样品，有可能影响HEVIgMELISA试剂盒戊型肝炎主要在发展中国家流行。在普通人群中的病死的使用性能。率