黑曲霉嗜热β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析.pdf

《黑曲霉嗜热β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、生物技术通报·研究报告·BIoTECHNoLoGYBULLETIN2014年第6期黑曲霉嗜热I]；一甘露聚糖酶在毕赤酵母中的克隆表达及其魔芋降解产物分析倪玉佳周曼昱欧阳嘉’郑兆娟勇强(1．南京林业大学化学工程学院，南京210037；2．南京林业大学森林资源与环境学院，南京210037；3．江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室，南京210037)摘要：根据毕赤酵母密码子偏好性优化设计合成一段来自黑曲霉BKO1的嗜热D一甘露聚糖酶基因，通过构建表达栽体pPICZaA—man线性化后电转化入不同的毕赤酵母宿主，获得最佳重组茵KM71．MAN，其发酵罐发酵酶活最高达23l8．8

2、5Iu，mL。表达产物纯化后的分子量约为4OkD，最适反应温度为80，最适pH为5．0。该酶在7O℃(pH5．0)保温44h仍能保留43％的酶活力且在pH3．0—7．0范围内保温70h(50~C)酶活力仍能保留85％以上。利用发酵罐所产重组酶酶解魔芋胶制备甘露低聚糖，产物以甘露二糖和甘露六糖为主，甘露低聚糖得率为55．6％。该重组p一甘露聚糖酶具有良好的热稳定性和pH稳定性，在魔芋制备甘露低聚糖中具有较好的应用潜能。关键词：D．甘露聚糖酶密码子偏好性毕赤酵母酶学性质低聚甘露糖Cloning，ExpressionofThermostable[I-mannanaseandth

3、ePreparationofMannooligosaccharideNiYujia’ZhouMinyuOuyangJia·ZhengZhaojuanYongQiang(1．CollegeofChemicalEngineering，NanjingForestryUniversity，Nanjing210037；2．CollegeofForestResource&Envirotrment，NanjingForestryUniversity，Nanjing210037；3．JiangsuKeyLabofBiomass·basedGreenFuelsandChemicals，Na

4、nfing210037)Abstract：AccordingtOthePichiapastoris’scodonpreference，aDNAsequenceencodingAspergillusnigerBK01tbermophilic3-mannanasegenewasdesignedandsynthesized．Firstly，itwasinsertedintopPICZaAandresultedinrecombinantexpressionvectorpPICZaA·man．Then，pPICZctA—manwaslinearizedandtransformedi

5、ntodifferenthostsbyeleetrotransformation．AnoptimalrecombinantstainKM71一MANwasobtainedbyscreeningactivity．UsingrecombinantstrainKM71-MAN，recombinantmannanasewasoverexpressedanditsactivityintheculturemediumreached2318．85IU／mLina3Lfermentor．Recombinantenzymehadanapparentmolecularsizeofabout4

6、0kDbySDS-PAGE，andoptimalactivityatpH5．0and80~C．Itwashighlythermostable，retaining43％ofenzymeactivityafter44hofexposureat70qCandpH5．0．Moreover．itremainedover85％activityfrompH3．0topH7．0aftertreatingat50℃for70h．Usingthiscrudeenzyme．themainhydrolysisproductsyieldedfromkonjakgumweremannobiosean

7、dmannohexaoseandtheyieldofmann00lig0saccharideswas55．6％．TherecombinantenzymeexhibitedgoodthermalandpHstability，whichindicatedthattherecombinantyeasthaspotentialvalueinpreparationofkonjacgummannooligosaccharides．Keywords：13-mannanaseCodonpreferencePichiapastorisEnzym