练习血红蛋白的提取和分离.doc

《练习血红蛋白的提取和分离.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、按住Ctrl键单击鼠标打开教学视频动画全册播放课题3血红蛋白的提取和分离蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。怎样提取蛋白质呢？（二）进行新课1．基础知识蛋白质的物化理性质：______________________________________________________，由此提取和分离各种蛋白质。1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：（图5－13a）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分

2、子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。（3）分离过程：（图5－13b）混合物上柱→__________→___分子流动快、___分子流动慢→收集___分子→收集__分子＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。1．2缓冲溶液（1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），______________________________________。（2）缓冲液作用：____________

3、__________________________________。1．3凝胶电泳法：（1）原理：不同蛋白质的__________________________不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。［思考］阅读教材后，填写下表：决定运动方向形成库仑力形成阻力决定运动速率电荷性质电荷量分子形状分子大小（2）分离方法：_______________________、____________________等。（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多

4、的_______，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅___________________。2．实验设计2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？______________、_____________、_______、_____________。思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？_____。_______________________________________________。2.2选择实验材料（1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？_________

5、____。___________________________________________________。（2）请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下列问题：血液由和两部分组成。血细胞中细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是。该化合物是由和构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的基团。2.3从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。洗涤红细胞的目的是什么？_____________________________，有利于后续步骤的分离纯化。红细胞的洗涤过程

6、为血液＋____________→___速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水→缓慢搅拌10min→____________离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无____色思考：加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？防止__________；防止______________；防止____________________________。思考：你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来？加入_________________，用玻璃棒________________一段时间。补充：加入蒸馏水后红细胞液体

7、积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。此时，红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯有机溶剂等。怎样除去这些杂质呢？由于它们的密度不同，科学家采取了离心分离的方法：红细胞破碎混合液→___速___时离心（2000c/min×10min）→滤纸过滤除去脂质→分液漏斗分离出血红蛋白2.4如何除无机盐离子和小分子有机物质呢？。_______。半透膜的_______性，大分子物质____能通过半透膜，离子和小分子__通过半透膜。在透析过程中，血红蛋白溶液中的离子和小分子不断通过

8、半透膜扩散进入到pH＝7的磷酸缓冲液中。思考：为何使用pH＝7的磷酸缓冲液？为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量？_______________________________________________