新型柞蚕双元基因转移载体的构建及在Sf9细胞中的表达.pdf

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1、2014，40(1)：0038-0044ISSN0257—4799：CN32—1115／SE-mail：CYKE@chinajourna1．net．cn新型柞蚕双元基因转移载体的构建及在Sf9细胞中的表达刘丹梅李文利安利佳(大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁大连116024；辽东学院农学院，辽宁丹东118001)摘要启动子、转座子、报告基因等转基因元件的优化以及基因转移载体的构建对外源基因的表达尤为重要。利用TAIL．PCR方法延长柞蚕丝素蛋白基因的5端和3端序列，插入柞蚕肌动蛋白基因l启动子驱动的红色荧光蛋白基因，

2、并利用piggyBac转座子元件构建新型柞蚕双元基因转移栽体pBac[A1一DsRed+Fib—GFP]一A1·piggyBac。通过对sf9细胞的转染实验，证明该双元基因转移载体系统能行使正常功能，而且比传统的双质粒载体转移系统具有更高的整合效率，在柞蚕转基因研究中具有应用潜力。关键词柞蚕；转基因；双元基因载体；细胞表达中图分类号Q785；$885．1文献标识码A文章编号0257—4799(2014)O1—0038—07ConstructionofNoveIBinaGeneTranerVectorforTussahS

3、ilk．wormandExpressioniInSf9CellsLIUDan—Mei’，LIWen．Li’ANLi．Jia’(’SchoolofLifeSconceand8『0fecn门0『0gy，DalianUniversityofTechno#gy，DalianLiaoning116024，China；SchoolofAgriculture，EasternLiaoningUniversity，DandongLiaoning118001，China)AbstractTheoptimizationofpromoter，

4、transposon，reportergeneandtheconstructionofgenetransfervectorsareparticularlyimportantforexpressionofforeigngenes．Inthisstudy，5and3endfragmentsoftussah(Antheraeaper-nyi)silkfibroingenewasprolongedbyTAIL—PCRtechnology，andwastheninsertedintotheredfluorescentprotei

5、ngenedrivenbytussahactiingeneA1promoter．piggyBactranspositionelementwasfurtherusedtoconstructthenoveltypeofbinarygenetransfervectorpBac[A1一DsRed+Fib—GFP]一A1一piggyBacfortussahgenes．TransfectionexperimenttoSf9celsshowedthatthebinarygenetransfersystemcouldworknorma

6、lly，andhadhigherintegrationefficiencythanthetraditionaldoubleplasmidexpressionsystem，suggestingpotentialapplicationintransgenicstudiesoftussahsilk—WOrm．KeywordsAntheraeapernyi；Transgene；Binarygenevector；Cellexpression柞~i：(Antheraeapernyi)是重要的经济昆虫，除柞感等特点，因而也是研究光周

7、期、神经内分泌调控¨蚕茧可用于缫丝之外，柞蚕蛹和蛾还作为昆虫和滞育调节等的模式昆虫之一2]。利用转基因技食品而广受欢迎。柞蚕体型较大，具有对光照敏术培育抗逆性强、产茧量高、丝质优或能改善食用品质的柞蚕新品种对稳定与拓展柞蚕产业具有重要作用。收稿日期：2013—07～23接受日期：2013-09-28资助项目：辽宁省高校自然科学基金项目(No．2008643)。转座子(transposon)在生物基因组中普遍存在，第一作者信息：刘丹梅(1973一)，女，副教授。并且其种类和数量影响到基因组的大小与结构J。E—mail：d

8、dliudanmei@163．corn在大量的基因组测序工作完成之前，大部分转座子通信作者信息：李文利，副教授，博士，硕士生导师。E—mail：biolwl@dlut．edu．CU是偶然发现的。当果蝇、冈比亚按蚊、家蚕以及蜜Correspondingauthor．E．mail：biolwl@dlut．edu．cn蜂等生物的基因组测