单克隆抗体综述.ppt

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1、小组成员:郭扬侯仲伟贾一鸣雷翔云李海涛单克隆抗体综述抗体是在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一类糖蛋白。它是能与相应抗原特异的结合、产生各种免疫效应（生理效应）的球蛋白。抗体的定义单克隆抗体的基本概念抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗

2、体，称为单克隆抗体。单克隆抗体的结构抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。"Y"的柄部称结晶片段(crystallinefragment,FC)，糖结合在FC上。单克隆抗体的细胞融合单克隆抗体制备流程单克隆抗体的细胞选择生产1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢

3、复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。单克隆抗体制备流程3）细胞融合的关键:1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。4）阳性克隆的筛选应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA

4、法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。5）克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。第一代单克隆抗体单克隆抗体技术的应用是现代生物科学领域中的重要进展之一。单克隆抗体（Monoclonalantibody，简称McAb）具有广泛的应用价值，它为生物学和医学等自然科学的研究开辟了新的途经。1975年米科勒尔斯坦将小鼠骨髓瘤细胞与用绵羊红细胞免疫小鼠后的小鼠脾细

5、胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既能产生抗绵羊红细胞抗体，又能进行分裂繁殖，创立了单克隆抗体杂交瘤技术。单克隆抗体指在一株B淋巴细胞系中的每个细胞只能产生一种它所专有的、针对一种它识别的抗原决定簇的抗体，从这样一株B细胞系产生的抗体即为单克隆抗体。杂交瘤细胞的生产过程第二代单克隆抗体经过基因重组的嵌合或人源化单克隆抗体嵌合抗体：指用人的恒定区取代小鼠的恒定区，保留鼠单抗的可变区序列，形成一个人-鼠杂合的抗体。其研制程序快，可大幅度降低异源抗体的免疫原性，却几乎保持亲本鼠单抗全部的特异性和亲和力。另外，它还具有人抗体的效应功能，如补体固定、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）

6、等。利用现有的无数已详细分析过的小鼠抗体，取其与抗原直接接触的那段抗体片段（互补决定区，CDR）与人的抗体框架嫁接，经亲和力重塑，可维持其特异性和大部分的亲和力，同时几乎去除免疫原性和毒副作用。人源化抗体人源化单克隆抗体制作图单克隆抗体的应用1．检验医学诊断试剂2．蛋白质的提纯3．肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术单克隆抗体药剂单克隆产品犬瘟热病毒单克隆抗体单克隆抗体的分子量小；特异性极强，可迅速到达病毒侵染的组织和细胞杀灭毒，达到快速治愈的目的。谢谢生物技术二班第二组