WI-03-22洁净室沉降菌测试方法.doc

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1、恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-22版号A.0洁净室(区)沉降菌检验方法页次1/5生效日期2020/01/021．目的制订洁净室(区)沉降菌检验方法，对从事测试的工作人员进行培训指导，规范检验方法及操作。2．适用范围本方法适用于洁净室(区)或无菌区域（包括超净工作台）沉降菌的检测和环境的验证。3.职责质检部对本规程实施负责。4.程序4.1仪器及要求：4.1.1仪器：分析天平、干燥箱、超净工作台、压力蒸汽消毒器、电热恒温水浴锅、恒温培养箱4.1.2恒温培养箱要求：必须定期对恒温培养箱进行校验。4.2器具

2、：烧杯（1000ml,2500ml,5000ml）、量筒（1000ml）、三角瓶(250ml,500ml)、硅胶塞、培养皿（φ90mm）4.3培养基：大豆酪蛋白琼脂（TSA）4.4器具灭菌：器具（如培养皿等）应按下述方法灭菌：置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。4.5测试条件4.5.1测试前，被测试洁净室（区）的温、湿度须达到规定的要求，风速或压差必须控制在规定值范围内。4.5.2温度和湿度：洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（

3、温度控制在18℃～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间为宜）。4.5.3压差：空气洁净度不同的洁净室（区）之间的压差应≥4.9Pa，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净度级别低的洁净室（区）一般要求呈相对正压。4.5.4测试时间4.5.4.1在空态或静态a测试时：1）对单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于10min后开始；2）对非单向流，测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。4.5.4.2在静态b测试时：1）对单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过10m

4、in自净后开始；恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-22版号A.0洁净室(区)沉降菌检验方法页次2/5生效日期2020/01/022）对非单向流，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。4.5.4.3在动态测试时，则须记录生产开始时间以及测试时间。4.5.5测试人员4.5.5.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。4.5.5.2空态和静态测试时，室内测试人员不得多于2人，当面积超过100m2又需快速完成测定任务时，可适当增加人数。4.6测试步骤4.6.1制培养皿（平板）4.6.1.

5、1培养基配制：按瓶签上的《用法》进行配制。以下配制量为1000ml。a.称量：称取瓶签上《用法》标示的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的量，倒入1000ml烧杯中。b.溶解：在装有大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基粉末的烧杯中加入蒸馏水1000ml，搅拌均匀后，加热煮沸至完全溶解。c.冷却：冷却至23±2℃。d.测pH值：使灭菌后为pH7.3±0.2。e.分装：分装于三角瓶中，盖上硅胶塞，包好。f.灭菌：121℃15分钟高压灭菌。4.6.1.2将已灭菌的大豆酪蛋白琼脂（TSA）培养基，冷至60℃左右，在无菌操作要

6、求下，倾注约20ml至无菌培养皿中（Φ90mm），加盖后室温放置凝固后。注：如采用其他规格的平皿，可适当增减培养基的量，使之在平皿中形成至少2mm厚的琼脂层。4.6.1.3制备好的培养基平皿如需存放后使用，应标记名称、制备日期等，存放在2℃～8℃环境下，1周内使用有效。4.6.1.4使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。4.6.2测试步骤4.6.2.1测试前培养皿表面必须严格消毒。4.6.2.2采样4.6.2.2.1将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐

7、个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。恩施金凰新材料有限公司文件编号WI-03-22版号A.0洁净室(区)沉降菌检验方法页次3/5生效日期2020/01/024.6.2.2.2采样点位置采样点的位置可以同悬浮粒子测试点a)工作区采样点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）b）可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点4.6.2.2.3最少采样点数目及其布置：a.最少采样点数目：面积m2洁净度级别10010000100000＜10≥10～＜20≥20～＜40≥40～＜100≥100～＜200≥200～＜4

8、00≥400～＜1000≥1000～＜2000≥20002～3481640801604008002224102040100200222236133263注：表中的面积，对于100级的净化工作台，指的是送风口面积；对于10000级，100000级的非单向流洁净室，指的是房间面积。b.在满足最少监测点数的同时，还宜满足最少培养皿数：洁净度级别所需φ90mm培养皿数（以沉降0.5h计）100