白介素33对乳鼠心肌细胞乏氧／复氧损伤时胞内活性氧自由基生成的影响.pdf

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1、中国心血管杂志2014年4月第19卷第2期ChinJCardiovascMed，April2014，Vo1．19，No．2·139·．基础研究．白介素33对乳鼠心肌细胞乏氧／复氧损伤时胞内活性氧自由基生成的影响李冠臻张新超【摘要】目的探讨白介素33(IL一33)对乳鼠心肌细胞乏氧／复氧损伤的保护作用及胞内活性氧自由基(ROS)生成的影响。方法分离培养sD乳鼠心肌细胞，将原代培养的心肌细胞随机分为单纯对照(C)组、加药对照(rIL一33100ng／ml，C1)组、乏氧／复氧(A／R)组、A／R+rII

2、一33(1、10、100ngJm1)组，乏氧培养3h后，复氧2h。免疫组化鉴定心肌细胞；MTY法检测细胞存活率；ELISA试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率；流式细胞仪检测细胞凋亡(AV—PI双标法)、胞内ROS生成量(ROS—DHE荧光探针)。结果与c组相比，A／R组心肌细胞存活率明显下降(P<0．01)。LDH漏出显著增高(P<0．叭)，凋亡率及胞内ROS含量显著增加(P<0．01)；与A／R组相比，IL一33治疗组剂量依赖性地提高细胞存活率(P<0．叭)，降低LDH漏出率、细胞凋亡率(P<0

3、．01)及胞内ROS含量(P：0．03)；加药对照组与C组相比．心肌细胞存活率、凋亡率、胞内ROS含量差异无统计学意义。结论IL一33在心肌乏氧／复氧损伤过程中可以剂量依赖性地发挥抗细胞凋亡作用．其保护作用机制可能与增强心肌抗氧化能力，减少胞内ROS生成有关。【关键词】白细胞介素33；活性氧；肌细胞；心脏；乏氧／复氧损伤InfluenceofIL-33onROSgenerationinneonatalratsduringanoxia／reoxygenation—inducedmyocardialin

4、juryLiGuanzhen，ZhangXinchao．DepartmentofEmergency，BeijingHospital，MinistryofHealth，Bering100730，ChinaCorrespondingauthor：ZhangXinchao，Email：xinchaoz@163．com【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofinterleukin一33(IL一33)onanoxia／reoxygenation

5、(A／R)一inducedinjuryanditsinfluenceonreactiveoxygenspecies(ROS)generationinneonatalrats．MethodsPrimarycardiomyocyteswereisolatedfromneonatalSprague—DawIeyratsandwererandomlydividedinto6groups：controlgroup，control+rIL一33100ng／mlgroup．A／RgroupandA／R+rIL一3

6、3(1，10，100ng／m1)groups．A／RgroupandA／R+rIL一33aresubjectedto3hoursofanoxia，followedby2hoursreoxygenation．Cardiomyocyteswereidentifiedbyimmunocytochemicalstaining．TheviabilityofthecellswasexaminedbyMTTassay．Theleveloflactatedehydrogenase(LDH)wasdetectedby

7、aLDHenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)kit．Theapoptosisofthecardiomyocyteswasobservedviafloweytometry(AnnexinVandpropidiomiodidedoublestainingmethod)，ROSlevelsweremeasuredbyROSfluorescentprobe—dihydr0ethidium(DHE)．ResultsComparedwithcontrolgroup，thea

8、poptosisrateofthecardiomyocytes，levelofLDHandROSwereremarkablyincreased(aⅡP<0．01)，theviabilityofcardiomyocyteswasimpairedsignificantlyinA／Rgroup(P<0．01)．ComparedwithA／Rgroup，theapoptosisrateofthecardiomyocytes(P<0．O1)，levelofLDHandROSpr