固相萃取-液相色谱-串联质谱法同时测定尿液中9种多环芳烃代谢物.pdf

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1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第3期2012年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry397～402固相萃取一液相色谱一串联质谱法同时测定尿液中9种多环芳烃代谢物丁昌明金银龙林少彬(中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京100021)摘要建立_r固相萃取一液相色谱一串联质谱I司时测定尿中2_羟基萘、1一羟基萘、2-羟基芴、3一羟基菲、1一羟基芘等9种多环芳烃代谢物的液相色谱一串联质谱测定方法。尿样中结合态的多环芳烃代谢物在葡萄糖苷酸酶一芳基硫酸酯酶缓冲液(pH5．0)作用下，于37℃水浴

2、中避光水解4h后，以C。。固相萃取小柱富集、净化，以甲醇洗脱，采用WatersSymmetryC。色谱柱，流动相为乙腈一0．2％氨水(72：27，／V)等度淋洗分离后进人质谱测定。在喷雾电压4kV，毛细管温度300℃下，以3一羟基菲”C为内标，采用SRM模式负离子扫描方式测定，内标法定量。9种多环芳烃代谢物在尿中的线性范围为O．90～100rtg／L；相关系数为0．9970~O．9990；回收率为79．0％～119．8％；相对标准偏差为4．3％～12．4％；检出限为O．04～0．90g／L；结果表明，本方法可用于尿中9种多环芳烃代谢物的测定。关键词液相

3、色谱一串联质谱；尿；多环芳烃代谢物1引言多环芳烃(PAHs)是最早被人类发现的一类环境致癌化合物，主要来源于煤炭、石油、木材等有机物的热解和不完全燃烧。PAHs数量多、分布广，与人类健康关系密切，是相当重要的致癌类化合物_1]。PAHs对人体健康的影响一直是研究热点。检测内暴露水平对预测和评估人群接触PAHs具有重要意义。PAHs经人体代谢后转化成葡萄糖苷酸或硫酸盐化合物，从尿液排出。因此通过测定尿液中PAHs代谢物，可以综合反映人体对PAHs的暴露情况。目前，研究最多的PAHs代谢物是芘的代谢物l一羟基芘(卜OHP)。但最近发现，卜OHP与尿中的其它

4、OH-PAHs的相关性不强，因此仅采用1-OHP作为生物标志物并不能真实地反映人体的PAHs暴露水平。为了全面反映各类人群的PAHs的内暴露水平和减小或消除个体差异带来的影响，须使用多个OH-PAHs作为共同生物标志物反映PAHs的内暴露水平。目前检测OH-PAHs的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)]、气相色谱一质谱法(GC-MS)[4-6]、液相色谱一质谱法(LC—MS)[7-l1]。与液相色谱一质谱法(LC—MS)方法比较，高效液相色谱法(HPLC)检出限过高，不适用于非暴露人群的检测；而气相色谱一质谱法(GC_Ms)虽然检出限低，灵敏度高，但

5、需要衍生化处理，而且，其前处理净化过程需要多柱联用，处理过程繁琐、耗时；液相色谱一质谱法(LC—MS)具有灵敏度高，检出限低的特点，在OH-PAHs的检测中具有优势。目前，利用固相萃取(SPE)一LC—MS测定的OH-PAHs的方法已多有报道。Ferrari等测定了卜OHP；wiele等嘲同时测定卜OHN，卜OHP，7-OHBap等8种OH-PAHs；Xu等同时测定了萘、芴、菲、芘等l3种OH-PAHs；朱鹏飞等同时测定了4种OH-PAHs。本研究以”c同位素为内标，利用SPE-LC-MS／MS同时测定人尿样中的多种OH-PAHs，包括2_羟基萘、l一

6、羟基萘、2一羟基芴、3一羟基菲、3一羟基屈、6_羟基屈、1一羟基苯并[a]蒽、1一羟基芘和9_羟基苯并[a】芘。与Xu等的方法比较，本方法缩短了水解时间、减少了浓缩步骤、将流动相梯度淋洗改为等度淋洗，从而减少了有机溶剂的使用量，缩短了样品的前处理和测定时间，提高了部分化合物的检出限。与Wiele等圈的方法比较，由于检测样品的基质不同，样品的检出限和回收率等暂时无法比较，但将流动相梯度淋洗改为等度淋洗，缩短了样品的测定时间。201卜04-25收稿；201卜06-14接受本文系国家“十一五”科技支撑基金(No．2006BAI19B01)资助项目E-mail

7、：shaobinlin@yahuoo．corn．cn_398分析化学第4O卷2实验部分2．1仪器与试剂LTQ-XL液相色谱一质谱仪(美国ThermoFisherScientific)：配电喷雾离子化源(ESI源)；漩涡振荡器(中国IKA-MS2)；24孔固相萃取装置(美国Supelcosil)；Envi-18固相萃取柱(3mL，500mg，美国Supelco公司)；超纯水机(Barnstead超纯水机)。甲醇、乙腈为色谱纯(德国Merck公司)；乙酸钠、乙酸为分析纯(北京化学试剂公司)；实验用水为经Bamstead超纯水机过滤的去离子水；氮气、氦气(>

8、99．999％)。1-羟基芘、2一羟基芴、葡萄糖苷酸酶、芳基硫酸酯酶购于Sigma-Aldri