必修部分的各种染色剂.doc

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1、《普通高中课程标准实验教科书•生物》必修部分的各种染色剂2004年通过审查并已经在全国四个省级实验区使用的人教版《普通高中课程标准实验教科书·生物》中，有不少实验涉及到生物体内化学物质的检测，而对各种化学物质的检测又是通过各种染色剂的呈色反应来进行判断的。现将新教材必修部分所涉及的各种染色剂作一粗略介绍，供师生实验时参考：试剂名称配制试剂用途作用原理颜色变化斐林试剂甲液：质量分数为0.1g/mL的氢氧化钠溶液。乙液：质量分数为0.05g/mL的硫酸铜溶液。使用时，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，混合后立即使用检测还原糖斐林试剂与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，

2、能够生成砖红色的氧化铜沉淀（CH2OH-(CHOH)4-CHO+2Cu(OH)2→CH2OH-(CHOH)4-COOH+Cu2O↓+2H2O）加热后呈砖红色沉淀苏丹III取苏丹Ⅲ0.01g，加90％乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀，即得。本液应置棕色的玻璃瓶内保存，在2个月内应用。检测脂肪苏丹III是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为0.15%），从而使脂肪呈现橘黄色。橘黄色或红色双缩脲试剂双缩脲试剂A：质量分数为0.1g/mL的氢氧化钠溶液。检测蛋白质在碱性溶液中，双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，蛋白质分子中含

3、有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应无色→浅蓝色→紫色双缩脲试剂B：质量分数为0.01g/mL的硫酸铜溶液。使用时，先向试管中加入2mlA，再向试管中加入3~4滴B碘液取6克碘化钾溶于20毫升蒸馏水中，搅拌到溶解后，加入4克碘，等碘充分溶解后，再加入80ml蒸馏水，贮存在棕色试剂瓶内检测淀粉碘液在中性或酸性环境下，碘分子容易与淀粉形成蓝色络合物蓝色甲基绿吡罗红0.25g，甲基绿0.15g，95%乙醇20mL，甘油20mL。将以上试剂混合溶解后用0.5%苯酚水溶液稀释至100mL。检测DNA核酸均为酸性，对碱性染料甲基绿和吡罗红具有亲和力。用这两种染料

4、混合液处理细胞时，由于DNA和RNA聚合程度不同，甲基绿分子有两个相对的正电荷，与聚合程度较高的DNA分子有较强的亲和力，可使DNA分子染成蓝绿色，而吡罗红分子中仅一个正电荷，可与低聚分子RNA结合使其染成红色。绿色吡罗红检测RNA红色健那绿B0.5g健那绿溶解于50ml生理盐水，加温到30~40℃，让其充分溶解即得检测线粒体健那绿B(JanusgreenB)可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使健那绿B染料始终保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中的健那绿B被还原成无色的化合物。蓝绿色溴麝香草酚蓝水溶液取0.1g溴代麝香草酚

5、蓝，溶解在100ml蒸馏水里，滴入0.1%氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液而呈蓝色检测CO2溴代麝香草酚蓝溶液pH值变色范围是6.0（黄）~7.6（蓝）。待测物若有二氧化碳，会形成碳酸而使溶液变成黄色由蓝变绿再变黄重铬酸钾溶液取重铬酸钾7.5g，加水使溶解成100ml，即得检测酒精酒精在重铬酸钾等氧化剂的作用下，能迅速氧化生成乙醛（CH3CHO），并进一步气化生成乙酸(冰醋酸CH3COOH)灰绿色龙胆紫检测染色体深蓝色取1g龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100ml，保存在棕色瓶内 染色体容易被碱性或酸性染液着色。龙胆紫是一种混合的碱性染料（主要是结晶紫和甲基紫的混合物）

6、，醋酸洋红染色液和改良苯酚品红是酸性染料（醋酸洋红材料在被醋酸固定的同时，洋红将核或染色体染成红色），因此三者都可以作为检测染色体的物质醋酸洋红染色液将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中，边煮边搅拌，煮沸(沸腾时间不超过30s)，冷却后过滤，即可使用。也可再加入1%～2%铁明矾水溶液5-10滴，至溶液变为暗红色而不发生沉淀为止。如制作永久标本染色液时，可加入饱和氢氧化铁或醋酸铁(媒染剂)溶液数滴，至染色液呈浅蓝色为止。红色改良苯酚品红20ml苯酚品红染液（将45ml母液，6ml冰醋酸，6ml37%甲醛混合均匀）加入180ml45%乙酸和3.6g山梨醇，静置两周后使用红色