糖化终末产物刺激胰岛中NADPH氧化酶水平升高.pdf

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1、实用医学杂志2014年第30卷第6期糖化终末产物刺激胰岛中NADPH氧化酶水平升高林宁李晓永张洪梅苏青摘要目的：研究体外糖化终末产物(AGEs)对大鼠胰岛NADPH氧化酶表达的影响。方法：分离大鼠胰岛．用AGEs刺激胰岛细胞2、12、24、48h，采用实时荧光定量PCR检测Nox2表达水平的变化，化学发光法检测NADPH氧化酶活力结果：AGEs作用l2、24h后，Nox2mRNA水平较对照组分别上升1．75、2．3l倍(P<0．05)．随着AGEs作用时间的延长，NADPH氧化酶活力逐渐升高，24h时迭最高，后有所下降，但仍高于对照组。结论：糖化终末产物作用于胰岛后导

2、致NADPH氧化酶活性增加，进而引起胰岛损害。关键词糖化终末产物：NADPH氧化酶；氧化应激；原代胰岛TheefectofAGEsOilNADPHoxidaseexpressionintheprocessofisletinjuringL／NNing．LIXiao—yong，ZhangHong-mei，SUQing．DepartmentofEndocrinology，XinhuaHospital，ShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicine，Shanghai200092，ChinaCorrespondingauthor：SUQin

3、gE—moil：suqingxinhua@163．com【Abstract】ObjectiveT0investigatetheeffectsofadvancedglycationendproducts(AGEs)onNADPHoxidaseexpressioninratspancreaticcells．MethodsIsetsofratswereisolatedandintervenedwithAGEsforcertaintimes(2，12，24，48h)．TheNox2mRNAexpressionwasassayedbyreversetranscriptionpo

4、lymerasechainreactionfRT—PCR)andRea1．timePCR．NADPHoxidaseactivitywasdetectedbylucigenin．enhancedchemiluminescence．ResuitsNox2mRNAlevelwas1．75．2．31-foldhigherinAGEsintervenedgroupthancontrolat12hand24hrespectively．TheNADPHoxidaseactivitywasincreasedbyAGEsstimulationinatimedependentmanner

5、．Adistinctpeakwasat24hoursandthenwithadecline．whichiSstillhigherthanthatofthecontro1．ConclusionExposureofratislettoAGEsinducesNADPHoxidaseexpressionandleadstoiniuryofislet．【Keywords】Advancedglyeationendproducts；NADPHoxidase；OxidativeStress；IsolatedratisletsNADPH氧化酶是与质膜结合的微小的电子传本研究通过将AGE

6、s作用于大鼠胰岛细胞．观递链．它能够将分子氧通过单电子还原产生超氧阴察胰岛细胞中NADPH氧化酶及其亚单位2(Nox2)离子，并以此为基础形成一系列二级产物。Nox2的表达情况，探讨AGEs通过NADPH氧化酶途径(gp91phox)是其主要的功能亚单位，与氧化应激密对胰岛细胞ROS产生的影响。切相关[。在细胞内．活性氧的来源有两个：线粒体1材料与方法及线粒体外(即NADPH氧化酶途径)。传统观念认1．1实验动物雄性Sprague—Dawley(SD)大鼠，清为，吞噬细胞活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)洁级，购自上海斯莱克实验动物有限责任公

7、司．生主要来自线粒体外，主要由NADPH(即还原性辅酶产许可证号：SCXK(沪)2003—0003，使用许可证号：Ⅱ)氧化产生超氧阴离子．在此基础上再生成其他SYXK(沪)2003—0031。饲养于上海交通大学医学院类型的ROSE。但目前也有研究表明．NADPH氧化附属新华医院实验动物中心。大鼠6周后，体重酶途径在一些非中性粒细胞的ROS生成中也有着250～300g时用于实验。分离细胞前12h禁食，自重要的意义[3]。我们的前期研究表明，糖化终末产由饮水。物可以通过氧化应激产生活性氧直接损伤胰岛细1．2主要实验试剂1640低糖培养基、胎牛血胞[，但对