内吞与内膜系统.ppt

《内吞与内膜系统.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、植物细胞胞吞作用和内膜系统的荧光显微观察植物细胞的吞排作用细胞伸长生长所需要的物质分别在内质网(如蛋白质、脂类)和高尔基体(细胞壁的一些组分，如果胶、半纤维素)合成，运输小泡胞吐作用分泌至胞外或质膜上，促进新的细胞膜和细胞壁的生长另一方面，在细胞扩展增长过程中一些过剩的蛋白质、多糖、细胞壁前体物质等细胞成分，需要通过胞吞作用重新回到胞质中使之得以及时回收，循环利用，即细胞的内吞和外排两个过程保持基本的相对平衡在整个膜泡吞排作用（cytosis）中，必须有能量的保证。例如，膜泡组装形成过程中的小G蛋白，运输过程

2、中的细胞骨架及相应的马达蛋白，以及膜融合过程中Rab蛋白等均发生GTP或ATP的水解反应。内膜系统(endomembranesystems)内膜系统是指内质网、高尔基体、囊泡、溶酶体和液泡等细胞器。这些细胞器的膜是相互流动的,处于动态平衡,在功能上也是相互协同的。FM类染料FM类染料是水溶性的苯乙烯类复合物，对细胞无毒性作用，使用方便常广泛用于质膜和囊泡等的各类研究常用的染料有FM1-43（Ex510/Em626）和FM4-64（Ex558/Em734）。FM类染料与质膜及内膜细胞器特异结合后发出高强度的荧光，需

3、要借助胞吞作用才能进入细胞内。FM4-64在水相中没有荧光，只有插入脂质生物膜后才显示较强的荧光，胞吞回收的囊泡因吞进细胞内部而被荧光标记，利用这种荧光探针能够对细胞的胞吞过程进行有效标记。FM类染料染色原理一、材料、试剂1.材料：烟草悬浮细胞2.试剂：1）烟草悬浮细胞培养基2）FM4-64（膜染料）3）叠氮化钠4）山梨醇5）ERTracker-Blue/White(内质网的特异染料)二、实验步骤取3个共聚焦专用培养皿，分别编号①、②、③；往①中加入198µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和2µLFM4

4、-64；往②中加入178µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和20µL山梨醇；往③中加入194µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和4µLNaN3；置显微镜下观察①中的荧光分布模式；观察完毕①中的FM4-64后再往①中加入4µLERBlue/white；往②、③中分布加入2µLFM4-64，随后先观察②中的荧光分布；接着再观察③中的荧光分布模式；最后再次观察①中FM4-64、ER-Blue/White双染下的荧光分布。内膜系统及内吞作用的荧光标记观察取3个共聚焦专用培养皿，分别编号①、②、③；往②

5、中加入178µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和20µL山梨醇；往③中加入194µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和4µLNaN3；往①中加入198µL含BY2细胞培养液（1000mL移液器）和2µLFM4-64；置显微镜下观察①中的荧光分布模式；观察完毕①中的FM4-64后再往①中加入4µLERBlue/white；往②、③中分布加入2µLFM4-64，随后先观察②中的荧光分布；接着再观察③中的荧光分布模式；最后再次观察①中FM4-64、ER-Blue/White双染下的荧光分布。三、结果与

6、分析正常BY2的FM4-64标记FM4-64先标记于BY2外周，并随着时间的延长逐渐进入细胞内部。叠氮化钠处理的的BY2的FM4-64标记叠氮化钠能抑制BY2的呼吸作用，进而抑制细胞的内吞作用，导致FM4-64不会进入BY2内部，说明FM4-64是通过内吞作用而不是扩散进入BY2的。质壁分离的BY2的FM4-64标记用山梨醇处理BY22-3分钟，使BY2发生质壁分离，证明FM4-64是一种膜染料。ERtracker-Blue/white和FM4-64双标记细胞膜显示红色，而一部分细胞器显示紫色（红色蓝色叠加）表明

7、内吞的FM染料部分进入内质网。实验报告1）FM4-64染料可以进行什么生理过程及细胞器的标记？2）你在实验过程中看到的FM4-64/山梨醇预处理及叠氮化钠预处理后再染色的实验现象有何不同，为什么？