猪瘟净化检测方案.doc

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1、猪瘟净化检测计划书＿＿检测室检测计划编号：被检测单位被检测动物种猪被检动物总量动物年龄种母猪及种公猪免疫状况猪瘟免疫过被检动物基本情况说明种猪移场，检测数量检测比例检测项目：猪瘟抗原检测目的依据猪瘟抗原检测情况，进行必要的防疫，对于三次免疫未产生抗体，并持续检测出抗原的种猪予以淘汰，保证猪场猪瘟净化。检测方法胶体金检测检测样品来源种猪场现场采样样品保存条件血液离心后，恒温4℃保存，检测前升至室温仪器及设备离心机1台材料及工具一次性5ml注射器、一次性2ml自带盖离心塑料管。无菌注射用水（5ml×10支）5盒，猪瘟抗体胶体金和猪瘟抗原胶体金各

2、足量（按常规准备猪瘟抗原胶体金预计检测净化数量的1.25倍准备，猪瘟抗体检测胶体金按净化数量的5%准备）检测实施措施检测条件：检测室温度20-30℃之间，相对湿度45-60%。操作方法：见附件一。预计检测日期2011年12月日结果分析判定依据检测结果提出相应措施，分析方法见附件二报告日期2011年12月日检测室审批检测负责人（签字）：年月日主管部门审批主管部门（盖章）：年月日主管经理审批主管经理（签字）：年月日备注制表人:审核：附件一：猪瘟净化的操作流程一、基本原理猪瘟是一种高度接触性传染病，表现急性、亚急性、慢性、不典型或不显症状的病程，

3、十分复杂，传染性强，发病率和死亡率都很高。猪瘟净化是对猪场内经过免疫猪群的免疫效果、有无野毒存在的有效评估，对于带有野毒并对免疫钝感的种猪进行淘汰，能有效保证猪场免受猪瘟疫病的干扰，提高猪场的猪只存活率和出栏率，提高种母猪的育成率，对于规模性养猪场具有十分重要的意义。胶体金检测法是一种常用的免疫标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原、抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在兽医临床使用的免疫印迹技术几乎都使用了胶体金标记。具有快速、操作简单的特点。二、血清提取对预留母猪进行抽取耳静脉血1.5m

4、l，装入2ml的离心管内，凝固后离心，析出的液体即为被检血清。另外，也可以使用一次性注射器采血，装血于小试管内，使之凝固成一斜面，放于室温条件下，待血清析出后，倒出即可检测。集中检测时，可以把血清放于4℃冰箱中密闭保存。三、检测1、猪瘟野毒预筛预检血清回温至室温。猪瘟抗原胶体金检测卡如果在4℃冰箱中保存的，也要回温至室温。使用一次性滴头取0.5ml预检血清，向检测卡的检测孔内滴入3滴血清，检测孔侧应向下倾斜0.5cm，使血清充分与纤维膜内的单克隆抗体充分作用，沿胶体金自然扩散到T、C检测线，5-10min，判定，出现T线反应的为阳性。阳性反

5、应的猪再进行猪瘟抗体检测（有条件可以进行兔体交互免疫试验和荧光抗体试验，由于成本较高，操作繁琐，生产场一般不选择此检测方法）。2、猪瘟抗体检测使用一次性滴头取0.5ml预检血清，向检测卡的检测孔内滴入3滴血清，检测孔侧应向下倾斜0.5cm，使血清充分与纤维膜内的单克隆抗体充分作用，沿胶体金自然扩散到T、C检测线，5-10min，依据T检测线与标准检测卡对比，判定抗体的滴度。四、诊断试纸结果判定可能遇到的若干问题1、若猪发病处于潜伏期时，血液中的病毒量可能较少，相应采样的病毒数量较少。在反应开始的3-5min时T线可能呈现较淡，到10min，

6、反应结束后，线条会呈现的相对清晰；2、“回线”现象：若反应结束一小时后，T线处再有线出现，这是胶体金倒流现象造成，硝酸纤维膜具有双向的毛细渗透作用，若滴加检测样品量过多，膜在湿润的状况下，可能出现渗透现象，而试纸CT线处有肉眼见不到的痕迹，若胶体金沉落，便会呈现红色线条，该结果无效；3、“检测中T线消失”现象：主要是样品中病毒浓度过高，当病毒浓度过高，在T处先形成的夹心免疫抗原抗体复合物被游离的病毒竞争性结合，失去相应的结合位点，从而出现红色线条逐渐变浅，甚至消失；4、“检测中C线消失”现象：可能患猪经过单克隆抗体的治疗，而目前单克隆抗体

7、基本以鼠源为载体，而胶体金C线处包被的二抗也为鼠源二抗，或者，猪食入了被鼠污染的食物或老鼠也会造成患猪体内产生免疫抗体，从而出现C线消失的现象；5、使用不同品牌试纸检测同一份样品，结果不一致。主要是选择的单克隆抗体位点不同造成的微小差异，由于不同地区流行的毒株有可能存在病毒抗原飘移，出现检测结果差异；6、“白板”现象：导致原因可能有：滴加样品量过多(≥5滴)，同时滴加的速度过快；样品的pH值偏酸或偏碱，导致胶体金结合异常；试纸保存不当，试纸室温下保存即可，若存于4℃冰箱，使用前应置于室温，待恢复到室温方可使用；试纸取出后，应尽快进行检测，检

8、测区不能沾湿。附二：猪瘟净化时间的确定与检测结果的应用一、猪瘟净化时间的确定猪瘟净化是规模化猪场定期评估受到猪瘟威胁程度的监控手段，一般每年定期监控一次，时间应该集中在仔猪断奶后